离子交换色谱2016.pptx

离子交换色谱;内 容;一、基本原理;2、平衡常数 离子交换反应和其他化学反应一样，完全服从质量作用定律，且离子交换剂与溶液中的离子或离子化合物所进行的离子交换反应是可逆的。 阳离子交换剂RA，在溶液中解离出阳离子A+与溶液中的阳离子B+发生可逆交换反应： RA+B+ ?RB+A+ 离子交换剂对溶液中不同离子具有不同的结合力，离子交换剂的选择性可用平衡常数K表示：; 1 2 3 4 5;二、离子交换剂的基本性质;离子交换剂;2、亲水性离子交换剂 基质为与水亲和力较大的天然或人工的化合物 （1）纤维素离子交换剂 以微晶纤维素为基质，再引入电荷基团构成，最为广泛使用的是二乙氨基乙基（DEAE-）纤维素和羧甲基（CM-）纤维素。 （2）交联葡聚糖离子交换剂 以交联葡聚糖G-25和G-50为基质，通过化学方法引入电荷而制成的。 （3）琼脂糖离子交换剂 以交联琼脂糖CL-6B为基质，引入电荷基团而构成。;三、离子交换介质的选择原则;2、缓冲液的选择 （1）对于两性蛋白质来说，缓冲液的pH决定蛋白质在该缓冲体系下所带的电荷， 以一个PI为5的蛋白为例：;（2）在离子交换剂的交换容量固定的情况下，起始缓冲液的浓度应尽可能的低（一般低于0.02 mol/L）。 （3）缓冲液离子不影响被分离蛋白或干扰其活性，同时不应影响目标蛋白的溶解度。 ;四、离子交换色谱的基本操作;（一）交换剂的预处理、再生 （1）用水浸透使干树脂吸水溶胀，再用酸、碱处理除去水中的不溶性杂质。 （2）再生是指将用过的离子交换剂恢复原状的方法。;当所用的交换剂与待分离物质各组分之间亲和力差不多而需要交换剂体积较大时，以增加柱长为宜，使待分离组分被洗脱后再结合于交换剂上的概率增加。柱的直径与高度比以1:20左右为宜。 如采用离子强度较大的洗脱液梯度洗脱时，以选用粗而短的柱子为宜，因为当柱上洗脱液的离子强度高到足以完全取代被吸附离子时，这些被置换的离子则以同洗脱液等速率向下移动，如果柱细长，就增加了脱附离子扩散的机会。 ;（三）样品上柱、洗脱和收集 （1）上柱 （2）洗脱 IEC中的洗脱是至关重要的一步，从交换剂上把被吸附的物质洗脱下来，有两种方法：一种是增加离子强度，置换出被吸附的离子；另一种是改变pH，使被吸附的离子解离度降低，从而减弱其对交换剂的亲和力而被脱附。 （3）收集 用部分收集器分部收集，收集体积一般为柱体积的1%~2%。;Thank you ！