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例： 芦丁含量测定 0.710mg/25mL （1）分别移取0.2000mg/mL的标样 0~5mL→25mL （2）取样品3.0mg→25mL 学习小结 通过本课程的学习，你将掌握如下内容了吗？ 光谱分析法的含义及分类 分光光度法的原理 朗伯-比尔定律的计算（一） 作业： 第128页：1、2、3、4、7、8、14 * Company name * * * * * 第六章 仪器分析 上海市医药学校 Office:药物分析课题组 模块一 紫外分光光度法 第二节 分光光度法 学习内容： 理解比色法和分光光度法的基本原理； 了解紫外分光光度计的基本原理 学会紫外分光光度计的保养； 工作内容： 规范操作722s分光光度计 规范操作755B紫外分光光度计 工作任务一 使用722S型分光光度计测定高锰酸钾的吸收光线 使用722S型分光光度计测定高锰酸钾溶液的浓度 绘制标准曲线 测定未知样品的吸光度 求算未知样品的浓度 思考题的讨论 完成实训报告书 任务一： 722S型分光光度计的操作步骤 开机、预热 确定滤光片位置 本仪器备有减少杂散光，提高340~380nm波段光度准确性的滤光片，位于样品室内侧，用一拨杆来改变位置。 当测试波长在340~380nm波段内如作高精度测试可将拨杆推向前， 通常可不使用此滤光片，可将拨杆置在400~1000nm位置。 调整波长 使用仪器上波长调节旋钮，即可方便地调整仪器当前测试波长，具体波长由旋钮左侧的显示窗显示，读波长数时目光垂直观察。 调整功能键 TRANS.透射比 ABS.吸光度 FACT.浓度因子 CONC.浓度直读 任务一： 722S型分光光度计的操作步骤 调整透光率 功能键放置于“T” 调100%：将用作背景的空白样品置入样品室光路中盖下试样盖（同时打开光门），按下“100%T”键即能自动调整100%T（一次有误差时可加按一次）。 调0%：打开试样盖（关闭光门）或用不透光材料在样品室中遮断光路，然后按“0%”键，即能自动调整零位。 任务一： 722S型分光光度计的操作步骤 测定吸光度 功能键放置于“A” 改变试样槽位置让不同样品进入光路 仪器标准配置中试样槽架是四位置的，用仪器前面的试样槽拉杆来改变，打开样品室盖以便观察样品槽中的样品位置最靠近测试者的为“0”位置，依次向外拉出相应的为“1”“2”“3”位置，当拉杆到位时有定位感，到位时请前后轻轻推动一下以确定定位正确。 读取数值并记录。 任务一： 722S型分光光度计的操作步骤 任务二：吸收光谱曲线的绘制——教师演示 标准溶液的配制 准确称取高锰酸钾（基准）0.125g,在小烧杯中溶解，定量移入1000mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。 试样准备 吸取上述标准溶液20mL于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀 测定 1cm比色皿，以蒸馏水作空白 波长选择：450、460、480、500、520、 525（此处多选几点）、530、540、560、580、600 分别测定个波长下的吸光度A。 绘制吸收光谱曲线 以波长为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制曲线 找出最大波长λmax。 0 λ(nm) 525 A 任务三：标准曲线的绘制——学生分组实训 标准系列溶液 取6只25ml的容量瓶，分别精密加入高锰酸钾标准溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml,加蒸馏水稀释至刻度，摇匀 测定 波长选定为λmax，以1号为空白 依次测定2~6号标准系列比色液的吸光度A值。 绘制标准曲线 以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标 准曲线。 任务四：样品的测定——学生分组实训 样品试液的配制 取1只25ml的容量瓶，精密加入高锰酸钾样品液5.00ml,（约含KMnO40.5mg）,加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。 测定吸光度 在相同条件下，测定样品的吸光度 计算 从标准曲线上查出相应浓度的KMnO4 浓度，即为样品比色液的浓度。 概述 光谱分析 含义：根据物质对光的选择性吸收及光的吸收定律对物质进行定性和定量分析的分析方法。 分类：比色法、分光光度法 比色法 含义：比色分析法（简称比色法）就是通过比较有色物质溶液颜色深浅测定物质含量的分析方法。 分类：目视比色法、光电比色法 目视比色法 标准系列比色液 样品液与标准液比色 概述 一致 分光光度法 含义：根据物质对一定波长光线的吸收程度已确定物质含量的分析方法。运用棱镜或光栅作为分光器，用光电管和检流计测量溶液透射光的强度，并直接表示出透光率和吸收度，从而求得被测液浓度或含量。 分类：紫外可见分光光度法、红外分光光度法 一、概述 一、比色法和分光光度法特点 灵敏度高 适用于测量微量物质，最低浓度为10-5-10-7