磷脂酶Cβ1的过表达对葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响-第三军医大学学报.DOC

磷脂酶Cβ1的过表达对葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响 周恒宇1，邓华聪1，郑宏庭2，蒋 文3，南 静1，陈丹燕1 （1 重庆医科大学附属第一医院内分泌科，重庆 400016；2第三军医大学新桥医院内分泌科，重庆 400037；3重庆市中医院急诊科，重庆 400010） 摘 要：目的　观察过表达磷脂酶Cβ1（phospholipase C β1,PLCβ1）对葡萄糖刺激胰岛素分泌（glucose-stimulated insulin secretion，GSIS）的影响。方法　 = 1 \* GB3 ①设定葡萄糖浓度梯度：10、20、40、80、100 mmol/L，分别刺激INS-1细胞40 min，检测细胞培养上清液中胰岛素含量，确定最适的葡萄糖刺激浓度；设定时间梯度：20、40、60、80、120 min，以最适葡萄糖浓度刺激，检测胰岛素含量，确定最适的刺激时间。 = 2 \* GB3 ②以最适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后，RT-PCR检测PLCβ1表达变化。 = 3 \* GB3 ③构建PLCβ1真核表达载体（PCMV-HA-PLCβ1），转染INS-1细胞，Western blot检测INS-1细胞中PLCβ1蛋白的表达。 = 4 \* GB3 ④收集转染后INS-1细胞培养上清液，检测胰岛素含量。结果　用40 mmol/L葡萄糖刺激60 min，INS-