第十章节植物生殖工程资料.ppt

第十一章 植物生殖工程 第一节 概 述 一、植物生殖工程概念 植物生殖工程：是通过控制和利用植物有性生殖过程而改良植物的应用技术领域，主要指在离体条件下以生殖细胞和原生质体为对象所进行的遗传操作，包括整个有性生殖过程的控制和利用。 与体细胞工程比优点： ①有性生殖是大多数植物的自然生殖过程，是一种阻力较少的途径。 ②生殖过程中提供了许多基因操作的机会．如花粉管是引导雄配子完成受精作用的运载工具，具有作为外源基因载体的功能。 ③植物生殖系统中拥有许多天然的单倍体细胞，可以直接制备单倍体原生质体。 ④生殖系统中丰富多样的细胞类型可用于不同研究途。 ⑤单倍性的生殖细胞经过减数分裂发生了各种形式的遗传重组，具有极大的遗传变异性，因此通过生殖工程操作可以直接获得各种类型的新个体。 植物生殖工程包括 二大生殖系统：雄性生殖系统和雌性生殖系统 两种操作方式；活体操作和离体操作； 三个研究水平：即器官、细胞和原生质体水平。 二、植物生殖工程的基本操作 1、器官水平操作 A、试管授粉 试管授粉或试管受精是指为了克服交配的不亲和性，离体培养子房或胚珠而在试管中完成受精过程。 B、子房和胚珠培养 受精子房和胚珠培养的目的也是在于克服杂交或自交胚的败育。 未受精子房和胚珠培养既是诱导卵器细胞形成单倍体植株进行单倍体育种的途径，又是研究人工诱导无融合生殖和实验生殖生物学的好方法。 C、胚和胚乳培养 胚培养是克服远缘杂交困难经常采用的方法。胚乳是极核受精的产物，一般多为3n。因此进行胚乳培养的目的之一，在于培养三倍体植株以获得无籽的瓜果，如无籽西瓜、无籽柑桔和无籽枇杷等。 D、花药培养 离体培养花药是大量获得单倍体进行单倍体育种和遗传学研究的重要技术，也是研究雄核发育等生殖生物学问题的良好方法。 2、细胞水平的操作 （1）大孢子母细胞、大孢子和胚囊的分离 （2）花粉培养 花粉培养的优点是： A、可以直接研究花粉细胞的发育、脱分化与再分化过程。 B、体细胞组织来源的愈伤组织或胚状体形成的植株及混倍体的频率均可大幅度降低。 C、可以减少体细胞对花粉细胞发育的竞争和抑制作用，提高花粉诱导频率和成苗率。 3、原生质体的分离与培养 它包括卵及其他胚囊分子的分离、花粉原生质体的分离与培养、生殖细胞与精细胞的分离与培养、配子—体细胞融合的研究、受精工程的尝试等等。 第二节　未受精子房和胚珠培养 一、概 述 San Noeum(1976)首次利用大麦未受精子房培养出单倍体植株，该项研究成功的意义在于开辟了单倍体育种的另一途径，这对于花粉培养尚未获成功的物种尤为重要. 二、未受精子房和胚珠培养技术 ①选择基因型材料； ②确定接种期； ③选择培养基； ④采用一定的接种方式，如固体培养、液体漂浮培养、平放或直插等； ⑤保温培养； ⑥染色体鉴定； ⑦染色体加倍； ⑧胚囊植株及其后代观察。 三、胚囊植株的起源 ①卵细胞孤雌生殖为主 ②助细胞的无配子生殖 ③反足细胞无配子生殖 ④其他类型 四、胚囊植株的遗传表现 胚囊植株中的单倍体比例较高，二倍体比例较低，混倍体较少。而且胚囊植株绿苗率高(可达89．3％)，白化苗率低(8．8％)，与花粉植株白化苗率高的特点呈鲜明的对比，构成了子房培养的一个十分突出而且十分有意义的特点。 五、植物遗传工程的受体—胚囊 ①胚囊内的卵细胞、助细胞和中央细胞在子房成熟时期呈现部分无壁的状态 ②单倍体 ③世代交替的转折期与再生潜能 ④胚囊体积大，胚囊壁结构特殊 第三节 花药和花粉培养 一、花药和花粉培养的意义 花药和花粉培养最易大批量地获得单倍体，并且从花药或花粉获得的单倍体植株可以经自发或诱发染色体加倍而形成纯合二倍体，因此应用得最为广泛。 此外，花药内花粉数量多，本身为单倍体细胞，离散性好，发育同步性高，因此在遗传操作中具重要作用。 二、花药培养的基本技术和影响因素 基本过程包括： ①挑选适宜的基因型作材料； ②确定花粉发育时期； ③材料的预处理； ④诱导培养； ⑤分化培养； ⑥染色体数观察和染色体数加倍； ⑦花粉植株当代及后代观察鉴定。 影响因素： 1、材料基因型：茄科、禾本科、十字花科的植物所占比例较大。 2、材料的预处理： ①低温预处理；②离心预处理；③高温预处理或预培养。 三、雄核发育途径、饥饿与花粉二型性 1、雄核发育的途径 ①营养细胞发育；②小孢子发育；③营养核、生殖核共同发育；④生殖核发育；