第三章章节、细胞生物学研究探究方法(下)资料.pptVIP

第三章  细胞生物学研究方法 一、细胞培养 在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术。 体外细胞培养注意的几个环节： 1、物质营养：培养基 2、生存环境：无菌环境、合适的温度、一定的渗透压和气体环境 3、废物的排出：定时换培养基 原代培养(primary culture) 传代培养(secondary culture) * 第四节 细胞培养与细胞工程 原代培养 （primary culture）：直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。 将细胞转移到新的容器中培养称为传代或传代培养（passage）。 （一）动物细胞培养 组织块培养； 分散细胞培养。 细胞系（cell line）：原代培养细胞成功传代即为细胞系。 克隆（clone）：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。 细胞株（cell strain）：从培养细胞中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 传代 细胞系（Cell line） 成功 筛选 细胞株（cell strain） 表三、实验室中常用的几种细胞系 细胞系名称 细胞类型 来源 3T3 成纤维细胞 小鼠 HeLa 宫颈癌上皮细胞 Henrietta Lacks BHK21 成纤维细胞 叙利亚仓鼠 PtKl 上皮细胞 袋鼠 L6 成肌细胞 大鼠 PCI2 嗜铬细胞 大鼠 SP2 浆细胞 小鼠 SP2／0 骨髓瘤浆细胞 小鼠 CHO 卵巢细胞 中国地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 （二）植物细胞培养 单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株。 原生质体培养：培养脱壁后的细胞，特点： ①比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA； ②便于进行细胞融合，形成杂交细胞； ③适宜条件下可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。 二、细胞工程 1、细胞融合 2、单克隆抗体 3、显微操作 1、细胞融合 通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交。 同核体：相同基因型的细胞融合而成。 异核体：不同基因型的细胞融合而成。 自发融合：同种细胞在培养过程中自发合并的现象。 诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。 诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒 ）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电击和激光）。 B淋巴细胞能分泌特异抗体，但不能长期培养，瘤细胞可以在体外长期培养，但不分泌特异抗体。于是Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。 2、单克隆抗体技术 单克隆抗体技术 3、显微操作技术micromanipulation technique 是在倒置显微镜下利用显微操作器进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。 包括细胞核移植、显微注射、胚胎移植以及显微切割等。 细胞核移植技术已有几十年的历史，1952 年，Briggs和King等将不同阶段的蛙胚细胞核注入去核的蛙卵，构建核移植胚。Gordon（1962）证明原肠胚以后的细胞核移植能发育到成体。1997年，Wilmut等克隆了绵羊Dolly。 显微操作仪 转基因显微操作过程 密度梯度离心分离溶酶体、线粒体和微体 CsCl 密度梯度离心分离DNA * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *