扫描电化学显微术构建酶微米结构-分析化学专业毕业论文.docxVIP

山东大学博士学位论文摘 山东大学博士学位论文 摘 要 第一章首先对扫描电化学显微镜(SECM)的试验装置，工作模式进行了简要的 介绍。然后就SECM的应用在以下两个方面做了较详细的介绍：1．SECM在生物方 面的应用，其中包括对酶，抗原／抗体，DNA及细胞的检测和成像；2．SECM在各种 材料表面进行微修饰，尤其是生物材料微米图形的构建。本章共引用文献113篇。 第二章我们用葡萄糖氧化酶(GOx)修饰过的微米电极表征了辣根过氧化物酶 (HRP)，并将得到的结果与收集模式及反馈模式表征的结果进行了比较。我们首先 用交联法将GOx固定在金圆盘微米电极的周围，在含有葡萄糖及氢醌(H2Q)的溶 液中用此电极表征了HRP的活性。由于葡萄糖与溶液中的02可以在电极上的GOx 的催化下生成H202，H202与H2Q即可在HRP的催化下生成苯醌(BQ)，BQ在电极 上可以被还原生成H2Q，使探头扫描电流增大，从而表征了I-LRP的活性。由于用这 种电极表征HRP时底物中的一种即H202是在电极上生成的，而不是一直存在于溶液 中，所以用它表征所得的结果分辨率比收集模式好，而灵敏度较反馈模式要高。 第三章用凹形铂微米电极在铂基底电极上构建得到了GOx的微米点。在本章中 我们首先将电聚合绝缘及电化学刻蚀相结合制得了凹形铂微米电极，然后又用电化学 方法研究了GOx在铂电极上的电化学吸附特性，确定了GOx在铂电极上电化学吸附 的最佳条件为：GOx浓度为10 mg／mL，溶液中含有0．8x10。3 mol／L的Triton X．100， 电极电吸附电位1．3 V(vs．Ag／AgCl)，恒电位时间60 mill；最后将凹形铂电极应用到 电吸附构建GOx的过程中，将其作为参比电极及辅助电极，将基底铂电极作为工作 电极，通过GOx的电吸附构建得到了有活性的微米点，其直径在20岬左右，并用 SEM及SECM进行了表征。 第四章我们用扫描电化学显微术“蘸笔法’’构建了葡萄糖氧化酶(OOx)微米 点。本章将原子力显微镜中的“蘸笔式’’纳米刻饰技术(Dip-Pen nanolithography， DPN)技术的理念运用到SECM中。在工作中首先制作了双铂微米电极，根据上章 选择的晟佳条件将GOx电吸附富集到其中一根微米电极上。将电极逼近到铂基底电 山东大学博士学位论文极上以后，其中一个铂微米电极作为参比和辅助电极，而吸附了GOx的电极作为工 山东大学博士学位论文 极上以后，其中一个铂微米电极作为参比和辅助电极，而吸附了GOx的电极作为工 作电极，在其上施加一合适电位使GOx脱吸到溶液中，同时在基底铂电极上施加GOx 最佳的吸附电位，通过吸附一脱吸一吸附的过程使GOx固定到基底铂电极上得到有 活性的GOx微米点，并用SECM对其活性进行了表征，得到的微米点直径在20岬 左右。另外，在构建GOx微米点时，为了减小GOx扩散所引起的微米点的扩大，我 们还采用了在双铂微米电极和基底铂电极之间形成一个厚度在2-4 gan，直径与双铂 微米电极外径相同的液膜这一新技术。 第五章中我们在第四章的基础上将SECM“蘸笔法”构建生物物质微米点这一 方法进行拓展，将其运用到HRP微米点的构建中。本章中我们首先研究了生物素化 的HRP(Bio．HRP)在铂电极上的吸附及脱吸特性；在构建HRP微米点时，先根据 Bio．HRP在铂电极上吸附的最佳条件，将Bio．HRP吸附到自制的微米铂电极上，然 后将铂电极在合适电位下即．0．3 V(vs．AedAgCl)逼近到链霉亲和素化的基底上方10 grn左右，再将Bio．HRP从电极上自然脱吸，通过生物素与亲和素的反应将其固定到 基底上得到微米点，并用SECM对其活性进行了表征。同时在工作中我们也采用了 与第四章相同的技术，即在UME与基底之间形成一厚度为10 Bin左右，直径与UME 直径相同的液膜，以减小分子扩散对结果的影响。 关键词：扫描电化学显微镜，葡萄糖氧化酶，辣根过氧化物酶，构建，微米点。 山东大学博士学位论文Abstract 山东大学博士学位论文 Abstract In chapter one of this paper,the basic apparatus and operation modes of scanning electrochemical microscopy(SECM)were first introduced briefly．Then，the applications of SECM the applications of SECM in biologic system，including the detection and imaging of enzyme，antigen／antibody complex，DN