第十六章章节抗生素类药物的分析解析资料.ppt

3.杂质控制方法 反相高效液相、离子交换色谱和凝胶色谱。 葡聚糖凝胶SephadexC－10 自身对照外标法 生产过程 贮存过程 使用不当 高分子杂质 内源性(药物自身聚合物 ) 外源性(蛋白、多肽、多糖及其与药物的结合物 ) 发酵过程 控制重点 * 对抗生素的检查比其他药物更为严格，规定具体的操作步骤 * 过敏源为高分子杂质。 随着工艺的提高，外源杂质显著降低，主要是内源性杂质 * 由于结构不同的高分子杂质通常具有相似的生物学特性（过敏性），因此在药品质量控制中一般只需控制药品中高分子杂质的总量而不必控制不同结构的杂质。 因此，根据样品分子量差异进行分离的凝胶色谱法则具有明显的优势。 * β-内酰胺类抗生素的高分子杂质具有高度的不均一性和不确定性，故无法制备对照品，不能采用对照品法定量。中国药品生物制品检定所金少鸿教授等，根据β-内酰胺类抗生素在不同离子强度的介质中具有不同表现状态的性质，首次建立了凝胶色谱自身对照外标法定量测定β-内酰胺类抗生素中的聚合物。此方法已经载入《中国药典》2000年版和2005年版，用于国产β-内酰胺类抗生素的质量控制，并已被国内外β-内酰胺类抗生素生产厂家广泛使用。 ? 实验证明，在以水，0.01%SDS或0.5%葡萄糖溶液作为流动相时，β-内酰胺类抗生素可缔合形成表观分子量较大的缔合物，该缔合物在Sephadex G 10 凝胶色谱系统中的色谱行为与高分子杂质一样，表现为单一的色谱峰。利用这一特点，在Sephadex G 10 凝胶色谱系统中制定了新的定量方法-----自身对照外标法。 ? * 凝胶或高分子微球等填充剂用于分子排阻色谱 结晶性影响疗效。 （1）碘量法相比，汞量的优点是不需要对照品。（2）以未经水解的样品做空白；（3）以第二次滴定突越为终点。 1. 水解前先中和溶剂与样品 2. 加热时注意避免CO2的吸收 3. 空白校正 4. 酸性、酯类杂质干扰 * 与维生素C的类糖反应进行联系。维生素C形成的糠醛与吡咯加热至50℃后产生蓝色 蛋白质胍基的反应，氨基酸中只有精氨酸发生坂口反应。在碱性下胍基能被次溴酸钠氧化 * 亚氨基（＝NH） * * 硫酸庆大霉素C组分的HPLC-ELSD色谱图 庆大霉素标准品（A）及其样品（B）的HPLC-ELSD色谱图 1-硫酸盐；2-庆大霉素C1a；3-庆大霉素C2；4 庆大霉素C2b；5-庆大霉素C2a；6-庆大霉素C1 ；7-未知杂质 A B 蒸发光散射检测器（Evaporative Light-scattering Detector）是质量型检测器，只与待测物质的量相关，无所谓其光学性质或电化学性质。因此对于许多没有光学吸收特征的生物性物质的检测，蒸发光散射检测器提供了新一代的检测方法。 三、含量测定 主要用微生物检定法。部分药物采用HPLC法。 例 硫酸链霉素 Ch.P.（2010） 【含量测定】精密称取本品适量，加灭菌水 定量制成每1ml中约含1000单位的溶液，照抗 生素微生物检定法（附录Ⅺ A）测定， 1000 链霉素单位相当于1mgC21H38N7O12。 第四节 四环素类抗生素 一、化学结构与性质 （一）化学结构 A B C D 4 3 2 1 5 6 7 8 9 10 11 12 碳原子编号 四环素（TC）tetracycline * 金霉素 （CTC）chlortetracycline 氯四环素 * 土霉素 （OTC）oxytetracycline 氧四环素 * 多西环素 （DOTC）doxycycline 强力霉素 脱氧土霉素 * 美他环素（METC） metacycline * 两性 弱酸性、UV、旋光性 弱碱性 二甲胺基 弱碱性 酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性 1. 酸碱性 （二）性质 两性 溶解性 2. 旋光性 手性C 3. UV 共轭体系 4. 与金属离子生成有色配位化合物 酚羟基、烯醇基 Ca2+、Mg2+、Fe3+、Al3+ * pH3 ~ 7.5有 强烈荧光 * （1）差向异构化 5. 不稳定性 * 土霉素、多西环素不易差向异构化 * （2）降解性质 A. 酸性降解 * * pH＜2 pH＜2 * B. 碱性降解 （荧光） 二、鉴别 （一）HPLC法 例 盐酸土霉素 Ch.P.（2010） 【鉴别】 （2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致 （二）TLC法 固定相：