细胞稳定转染.PDFVIP

活性蛋 白整体 方案 Active Protein Solutions 细胞的稳定转染 稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上 ，使外源基因成为细胞基因组的一部分而得以复制。对细胞进 行稳定转染最终可筛选得到稳定细胞株 ，稳定细胞株在重组蛋白/抗体生产、基因编辑、功能研究等方面起着重要 的作用。本文主要介绍了细胞稳定转染的原理、如何进行稳转株筛选得到高表达的细胞株 ，同时还介绍了细胞稳转 的影响因素及稳定转染的应用。 稳定转染实验流程 从实验流程的角度看 ，稳定转染是建立在瞬时转染的基础上的 ：先对哺乳动物细胞进行转染 ，再对得到的细胞池进 行筛选最终得到稳定细胞系。在建立稳定转染细胞系时 ，我们需要使用选择标记来区分瞬时转染和稳定转染 ，通常 质粒中带有选择标记 ，选择标记会与目的基因共表达 ，由此可以筛选出阳性克隆 （外源基因已稳定整合至细胞的基 因组上 ），同时剔除未稳定整合的细胞。最终通过有限稀释得到稳定转染的单克隆细胞株。 细胞