玉米组培技术.ppt

玉米组织培养 主要内容： 植物组织培养的意义. 玉米组织培养的目的. 研究进展. 目前玉米组织培养的主要方法. 植物组织培养的意义 植物组织培养可以生产大量的优良无性系. 细胞融合可打破种属间的界限，克服远缘杂交不亲和性障碍. 可获得单倍体、三倍体及其它多倍体、非整倍体. 组织培养的植物细胞也成为在细胞水平上分析研究的理想材料. 玉米组织培养的目的 玉米组织培养的目的是让外植体能够高频率地诱导出愈伤组织，建立高效 的体细胞再生体系 ，为玉米遗传转化和细胞工程研究创造有利条件 。 玉米组织培养的研究回顾 Larue在 1949年用甜玉米的胚乳作外植体，首次诱出玉米愈伤组织，但未获得再生植株 。 1975年，Green和Phillips首次用A188的幼胚作外植体，诱导出二倍 体 愈伤组织 ，并再生得 到第一株无性系植株。 玉米组织培养的研究现状 现在已经能从多种外植体中诱导出愈伤组织，并再生出植株。例如：幼胚、花 药、幼穗等，其中幼胚是最易诱导，也是目前最常用的外植体。 玉米组织培养的主要方法（简介） 1、玉米花粉和花药组织培养 玉米花粉和花药的培养一般可获取单倍体植物，有利于促进玉米遗传育种工作的有效进展。 2、 玉米茎尖和根尖离体培养 玉米植株的根尖和茎尖分生组织具有良好的分化性能。玉米茎尖和根尖离体培养有利于促进完整玉米植株的生长,并且在取材上不受季节限制。 3、玉米幼胚的组织培养 玉米幼胚属于二倍体， 且分生能力较强。幼胚是最易诱导， 也是目前最常用的外植体， 但幼胚取材的时间受到严格的季节限制。 玉米幼胚组织培养的全过程 1、准备工作 接种室消毒 准备诱导培养基（N6+肌醇+L-脯氨酸1.38g/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D2mg/mL) 灭菌 2、外体消毒及挑幼胚 75%酒精擦玉米外层叶片 至超净工作台，用75%酒精擦玉米外层叶片，剥一层擦一层至完 用刀去掉1/3玉米籽粒 挑幼胚 接种到准备好的诱导培养基上（暗培养） 3、继代 准备继代培养基(N6+水解酪蛋白0.1g/L+L-脯氨酸0.69g/L+甘露醇20g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+2,4-D1mg/ml) 诱导两次后，转入继代培养基每7天继代一次，直至出透明、黄色、坚硬的愈伤组织，可用于转化（一般继代三次） 4、转化 浸染培养（22--25℃，暗培养3天） 恢复培养（暗培养3天） 筛选培养 分化培养 生根培养 壮苗 5、移栽及管理 移栽前，应对移栽用的基质进行灭菌。 移栽前，可将培养物不开口移到自然 光照下锻炼2-3天，然后再开口练苗1-2天，以适应将来自然湿度的条件。 玉米组培苗移栽时首先应把根部的培养基清洗干净，以免受细菌或真菌污染而影响幼苗生长。 移栽 玉米茎尖组织培养的全过程 1、准备工作 接种室消毒 准备培养基（MS+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L) 灭菌 1、玉米种子消毒 在500ml三角瓶中装入200—300粒玉米种子 用75%酒精清洗8min 0.1%升汞5min 无菌水洗2遍 加入无菌水静置8h 0.1%升汞8min 无菌水洗5遍 装入钣盒 28℃暗培养3天 2、接种 取出培养三天后的种子，接种到MS固体培养基中，根向下伸入培养基中，芽向上，芽萌发得不太好的继续放进饭盒中再培养。 接种到MS固体培养基中的芽放回28℃暗培养3-4天。 3、玉米茎尖转化 取出MS固体培养基中的芽放在无菌滤纸上 切根 镊子夹胚轴，在茎尖处用刀尖切半边。 在茎尖生长点划一小口。 转化后，接种于MS培养基中，进行暗培养。 3、移栽及其管理 培养3—5天后，将其移栽至至花盆中，其 中注意事项与前面的相同。后期的管理也于前者相近。 谢 谢 * * * *