散发性乳腺癌中UHRF1调控BRCA1转录的分子机制研究-肿瘤学专业毕业论文.docxVIP

散发性乳腺癌中UHRFl调控BRCAl转录的分子机制研究中文摘要 散发性乳腺癌中UHRFl调控BRCAl转录的分子机制研究 中文摘要 目的：研究散发性乳腺癌中UHRFI调控BRCAl转录的分子机制。 方法：通过报告基因、RT-PCR、Western blot，CHIP等方法研究在散发性乳腺 癌中UHRFl对BRCAl启动子活性、转录水平以及蛋白表达的作用，探索其作用 机制。 结果：在散发性乳腺癌中，UHRFl高表达，而BRCAl低表达或者表达缺失。 UHRFI可通过与HDACl，DNMTl及G9a形成转录复合物结合到BRCAl启动子 上并抑制其转录，同时通过HDACl，DNMTl，G9a这些转录因子使得BRCAl启 动子上发生了乙酰化组蛋白H3，乙酰化组蛋白H4的去乙酰化，三甲基化组蛋白 H3K4，二甲基化组蛋白H3K9的甲基化。荧光报告基因发现UHRFl复合物是通过 结合到BRCAl启动子的CCAAT盒上来抑制BRCAl启动子的活性的。利用RNA 干扰技术下调UHRF 1表达后，BRCA 1表达显著上调。雌二醇可上调BRCA2启动 子活性并抑制抑制UHRFl复合物结合到BRCAl启动子上。在过表达UHRFl后则 可逆转以上由雌二醇所引起的效应。而UHRFl可抑制BRCAI保护细胞抵抗H202 的能力。 结论：在散发性乳腺癌中，过表达的UHRFl与BRCAl启动子上的DNA甲 基化，组蛋白的去乙酰化，甲基化以及转录抑制复合物的形成密切相关。这是首次 报道在散发性乳腺癌中UHRFl通过介导BRCAl启动子上DNA甲基化以及组蛋白 修饰来调控BRCAl的表达。UHRFl可能是散发性乳腺癌一个新的，潜在的癌基因。 【关键词】：UHRFl，BRCAl启动子，DNA甲基化，组蛋白修饰 中图文分类号：R73 AbstractUHRFl Abstract UHRFl modulate transcriptional activity of the BRCAl gene in sporadic breast Cancer objective：To investigate how UHRF 1 regulates BRCA 1 transcription in sporadic breast cancer． Methods：We transiently transfected UHRF 1 plasmids into breast cancer cell lines， then performed RT—PCR、Western--blot，CHIP to detect whether they could combine to the BRCA 1 promoter，regulate its transcription and affect its protein level． Results：UHRF 1 is associated with BRCA 1 expression in BRCA 1 methylated breast tumors and normal breast tissues．ChIP results demonstrated that MyoD，CBP／p300 could bind directly to the BRCA 1 promoter in normal breast tissues and UHRF 1，HDAC 1， DNMT 1，or G9a could bind directly to the BRCA 1 promoter in BRCA 1 methylated tumors．ChIP．reChlP results indicated that UHRF 1 and HDAC 1，DNMT1．G9a formed an inhibiting transcriptional complex on the BRCA 1 promoter in BRCA 1 methylated breast tumors．Luciferase activity indicated that UHRF 1 complex were involved in the inhibition of the BRCA 1 promoter．UHRF 1 siRNA activated BRCA 1 expression significantly．UHRF 1 siRNA attenuated the UHRF 1 complex to the BRCA 1 promoter． E2 stimulated BRCA 1 promoter activity．ChIP experiments showed that E2 repr