三氧化二砷对白血病细胞U937的作用及机制探讨-内科学(血液病)专业论文.docxVIP

兰主壁垫苎兰旦查墨主堕 兰主壁垫苎兰旦查墨主堕 翌主翌墨兰!兰j竺兰 主要缩略语 AML acute myelocytic leukemia 急性髓系白血病 APL acute promyelocytic leukemia 急性早幼粒细胞白血病 As203 arsenic trioxide 三氧化二砷 ATRA all trans retinoic acid 全反式维甲酸 BSA bovine$erllm albumin 牛血清白蛋白 Caspase cystein-dependent aspartate 半胱氨酸蛋白酶 specific protease CvtC cytochrome C 细胞色素c CR complete remissiom 完全缓解 GSH glutathione 谷胱甘肽 胍 c-Jun N-terminal kinase c_JunN端蛋白激酶 ～n_PK mitogen activated protein 丝裂原活化蛋白激酶 kinase MPF maturation promoting factor 成熟促进因子 Ⅳ【PT mitoehondrial permeability 线粒体膜通透性转换 transition MM multiple myeloma 多发性骨髓瘤 PKC protein kinase C 蛋白激酶C ROS reactive oxygen species 活性氧 HUVECs human umbilical vein 人脐静脉内皮细胞 endothelial cells 华中科技大学同济医学院 华中科技大学同济医学院 硕士研究生毕业论文 三氧化二砷对白血病细胞U937的作用 及机制探讨 华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所 硕士研究生 周浩 导 师 邹萍教授 摘 要 【目的】 研究三氧化二砷(As203)对人类前单核白皿病细胞系U937细胞周期以及其 凋亡的影响，探讨As203抗肿瘤作用机制。 【方法】 将K562细胞、U937细胞和NB4细胞分别与不同浓度的As203共同孵育， 在不同时间点以台盼蓝染色检测白血病细胞存活率。利用流式细胞仪进行 细胞周期分析和Annexin-V分析，观察As203对白血病细胞周期的影响 以及诱导凋亡作用。为精确研究As203对U937细胞周期的影响，我们将 U937细胞进行细胞周期同步化以后与不同浓度的(1—69M)共同孵育， 同时予以低浓度咖啡因(Caffeine，21xM)与A8203(4ttM)联合作用。利 用流式细胞仪进行细胞周期分析和Annexin-V分柝，观察As203对U937 细胞周期的影响以及诱导凋亡作用。Western印迹检测磷酸化ATM表达以 了解ATM活化水平。还采用了cyclin B1及DNA双标记分析以观察周期 转换关键蛋白的时相性表达情况。 【结果】 ①AS203明显抑制K562、U937及NB4细胞生长并表现为时间、剂量依 赖性；②不同浓度As20](1～6p．M)作用于K562、U937细胞可以引起程 度不等的02／M期阻滞，与G2／M期阻滞并行出现的是程度不等的细胞凋 2 兰主登苎苎兰璺查堕兰堕 兰主登苎苎兰璺查堕兰堕 翌圭竺奎兰兰兰堕墨 亡，但凋亡率不及NB4细胞显著；③咖啡因与As203联合作用后U937细 胞凋亡率增加，且未见明显阻滞发生。(DAs203作用24小时后磷酸化ATM 水平显著升高，咖啡因与As203联用时ATM磷酸化水平降低。@As203 作用8h和16h组cyclin B1表达水平略低于对照组，24h组出现延迟的 cyclin B1表达增加。 【结论】 As!03可明显抑制U937细胞、K562细胞和NB4细胞的生长。As203作用 24小时即可诱导明显的GJM期阻滞。研究证明U937细胞G2fM期阻滞 的发生与ATM活化，cyclin BI表达受抑延迟有关，As203诱导的周期阻 滞可以被Caffeine解除并提高凋亡率。 【关键词】 三氧化二砷凋亡细胞周期G2[M期阻滞 白血病 兰主翌苎苎兰旦塑墨兰堕———————二生兰!墨兰j型坠Effects 兰主翌苎苎兰旦塑墨兰堕———————二生兰!墨兰j型坠 Effects and Possible Mechanisms ofArsenic Trioxide on Leukemic Call Line U937 Institute ofHematology,Union Hospital Tongji Medical College，Huazhon