生物化学实验甲课程简介和教学大纲 - 浙江大学生物实验教学 .docVIP

生物化学实验甲课程简介和教学大纲 课程代码： 071B0021 课程名称：生物化学实验甲 学分：2 周学时： 4 面向对象：生物类、农学类、医学类、生物工程二年级本科生 预修课程要求：基础化学；有机化学；普通生物学；生物化学 一、课程介绍 本课程设置两大板块的内容，一、基础综合系列实验，由蛋白质（酶）综合系列实验、核酸综合实验和代谢实验等3个部分组成，共安排了9个实验，学习掌握生物活性物质的提取、分离纯化、检测、鉴定等基本实验原理、方法和技术内容。二、自主实验设计与实践，由立题指导、（课题小组设计实验内容）、开题报告、做设计实验内容和结题报告（完成课题小论文）等教学环节组成。要求在4－5周时间内，由课题小组独立完成包括实验准备在内的所有自主设计的实验内容。 二、教学目标 (一)学习目标 本课程为专业基础课。计划安排“基础综合系列实验”和“自主设计实验与实践”。 学生通过基础综合系列实验——“蛋白质（酶）综合系列实验”、“核酸综合实验”和“代谢实验”等的学习，较系统地掌握生物化学实验的基本原理、实验方法和一定的实验操作技能，培养良好的实验素质。通过自主设计实验课题与实践训练，学习探索研究的基本方法，用所学的专业基础知识，独立自主地设计他们想要探究的实验内容并进行实践，进一步提高实验操作能力；体验实验研究中的挫折和成功，激发他们对探索研究的学习热情和对实验科学研究的自信心；初步具备实验课题的设计和完成能力，培养他们的创新意识和能力。 （二）可测量结果 1、掌握蔗糖酶的提取、初步分离纯化的基本原理和实验方法；会使用高速离心机； 2、掌握离子交换层析分离蛋白质（蔗糖酶）的基本原理、方法和技术，蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。 3、掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法；分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量；掌握分光光度计的使用方法。 4、掌握酶活力测定的基本原理和方法；会进行蔗糖酶活力和比活力的计算以及有关统计分析。 5、掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法；能够通过SDS－PAGE图谱分析蔗糖酶分离纯化产物（4个样品）的纯化效果；能测定在SDS－PAGE图谱中的某一蛋白质相对分子质量(Mr)。 6、初步掌握正交试验设计法的使用。会做运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度和pH值这四种因素对酶活力的影响的分析。 7、掌握植物基因组DNA的提取原理和方法；掌握琼脂糖凝胶电泳检测核酸的原理和操作以及对电泳检测基因组DNA结果的初步分析；掌握紫外吸收法测定核酸基本原理和方法；会用紫外吸收法测定基因组DNA纯度与含量，知道核酸（DNA、RNA）样品纯度判断的一般标准。 8、掌握鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理；掌握纸层析的原理和操作技术并能分析纸层析图谱以及相关计算方法。 9、有初步设计实验课题的能力，包括申请书的填写。在完成课题实验的过程，对于碰到的问题会通过各种途径和方式去解决，具有一定的分析问题和解决问题的能力。 三、课程要求 （一）授课方式与要求 1、基础综合系列实验：教师结合实验原理和方法，重点讲授实验操作步骤以及实验操作要点和注意事项等；学生在实验过程中，教师要全程关注同学的实验过程和指导实验操作，及时解决学生在实验中出现的问题，解答学生提出的问题。 2、自主设计实验与实践：教师要在立题指导、（课题小组设计实验内容）、开题报告、做设计实验内容和结题报告（完成课题小论文）等各教学环节中，要做好具体的自主设计实验的立题指导及学生所设计课题的可行性分析和修改；在学生进行课题实验的过程中，放手让学生自主实验的同时，要做好实验指导，及时解决实验中的问题；完成课题后，在结题报告上做相关的点评。 考试评分与建议 本课程总成绩分配为：“基础性综合系列实验”占50％，“自主设计实验与实践”占50％。 四、教学安排 第一次实验 蔗糖酶的提取 1、用研磨的方法，将酵母细胞破碎，提取蔗糖酶； 2、采用选择性变性（加热）和有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯。 第二次实验 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 1、用阴离子交换剂先与蔗糖酶样品可逆交换吸附，然后通过用盐离子强度逐渐提高的洗脱液，使蔗糖酶和其他杂蛋白质的电荷逐渐被中和，与离子交换剂的亲和力降低，把不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，从而达到分离蔗糖酶的目的。 2、在离子交换层析分离纯化的过程中，对分离纯化样品采用3.5－二硝基水杨酸法来初步判定各收集样品管中还原糖含量的多少，由此来确定并收集蔗糖酶纯化样品。 第三次实验 蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价 1、用Folin-酚法测定蔗糖酶蛋白含量； 2、用3.5－二硝基水杨酸法测定还原糖的含量的方法测定蔗糖酶活力； 3、通过测算比