三种豆科牧草的原生质体的培养及骆驼刺和鹰嘴紫云英的体细胞杂交-植物学专业论文.docxVIP

第一部分三种豆科牧草的原生质体培养 第一部分三种豆科牧草的原生质体培养 摘要 以草木樨状黄芪发根农杆菌凡转化系再生植株幼叶为材料，通过酶法分离 出大量有活力的原生质体。原生质体经持续分裂形成愈伤组织，并高频率分化出 再生苗。比较了不同叶龄、预处理时间、不同酶解时间和培养密度及不同激素组 合对原生质体分裂和再生的影响。结果表明，原生质体以3 x 105个／ml的植板密 度，采用液体浅层培养在附加有2．0mg／L2，4．D，0．2mg／L6BA，03 M甘露醇， 2％(w／v)蔗糖和500 mg／L水解酪蛋白的DPD培养基中，可获得最佳培养效果， 其细胞分裂频率达38％左右。由原生质体获得的愈伤组织可再生植株。 对骆驼刺发根农杆菌～转化系愈伤组织分离的原生质体进行了培养，并获 得了愈伤组织和分化的幼苗。结果表明，新转代8d的黄色颗粒状愈伤组织，为 获得大量有活力(80％)的原生质体的最佳状态。渗透压为540士3 mmol／L时， 原生质体以4×105个／ml的植板密度培养于附加有1．5mg／L2，4．D，0．2mg／L6BA， O．3M甘露醇，2％(w／v)蔗糖和500mg／L水解酪蛋白的DPD培养基中，分裂频率 可达41．7％。由原生质体获得的愈伤组织有再生植株的能力。 用甲硫氨酸抗性系鹰嘴紫云英的愈伤组织分离原生质体，发现该愈伤组织在 转代12d时，游离的原生质体活