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临床免疫学检验教案 第 次课 授课时间： 2007.9-12 课程名称 临床免疫学检验 年级 级 专业、层次 检验本科 授课教师 职称 课 型(大、小) 大班理论课 学时 2学时 授课题目（章、节） 第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备技术 基本教材或主要参考书 王兰兰，主编.《临床免疫学与检验》北京:人民卫生出版社 教学目的与要求： 掌握：McAb 及基因工程抗体和杂交瘤的概念。单克隆抗体制备技术的基本原理 熟悉：单克隆抗体制备的基本过程，基因工程抗体的制备技术 了解：单克隆抗体的应用，抗体库技术的应用和前景 内容与时间安排，教学方法： 内容： 1、杂交瘤技术的基本原理。 2、单克隆抗体的制备。 3、基因工程抗体制备 4、单克隆抗体在医学中应用。 时间安排：2.0学时 教学方法：CAI讲授结合板书 教学重点、难点： 重点： 1．杂交瘤技术的基本原理。 2．单克隆抗体在医学中应用 难点：制备单克隆抗体的基本过程。 教研室审阅意见： 教研室主任签名： 基本内容 手段 课堂设计和时间分配 第一节 杂交瘤技术的基本原理 一、杂交瘤技术 二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存 第二节 单克隆抗体的制备 一、单克隆抗体的产生 二、单克隆抗体的纯化 三、单克隆抗体的性质鉴定 四、单克隆抗体的特性 第三节 基因工程抗体制备 一、人源化抗体　 二、小分子抗体 三、抗体融合蛋白 四、双特异性抗体 五、噬菌体抗体库技术 第四节 单克隆抗体的应用 一、检验医学诊断试剂 二、蛋白质的提纯 三、小分子抗体的应用 四、抗体融合蛋白的应用 五、双特异抗体的应用 六、抗体库技术的应用和前景 简图 简表 示意图 设问 讨论 讲解杂交瘤技术的基本原理 20 min 讲解单克隆抗体的制备 30 min 讲解基因工程抗体制备 30 min 讲解单克隆抗体的应用 20 min 抗体种类： 第一代抗体 多克隆抗体（polyclonal antibody) 第二代抗体 单克隆抗体（monoclonal antibody) 第三代抗体 基因工程抗体（genetic engineering antibody) 经过反复克隆化获得的抗体阳性杂交瘤细胞株应立即扩大培养（除及时冻存的细胞外）。因多次传代易引起染色体逐渐丢失而使细胞产生抗体能力逐渐减弱甚至消失，还应尽早使用获得的抗体阳性杂交瘤细胞株制备单克隆抗体。 小 结 杂交瘤单克隆抗体制备技术的原理是利用聚乙二醇作为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细?胞与具有在体外不断繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一?体，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养（克隆化）,最终获得既能产生所需单克隆抗体,又能不断繁殖的杂交瘤?细胞系，将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在其产生的腹水中即可得到高效价的单克隆抗体。 20世纪80年代诞生了应用DNA重组及蛋白工程技术对编码抗体基因按不同需要进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体，称为基因工程抗体。 复习思考题、作业题 1．杂交瘤技术是如何问世的？其基本原理是什么？ 2．什么是单克隆抗体？其特性和局限性如何？与多克隆抗体有何异同？ 3．杂交瘤细胞的克隆方法有哪些？ 4．细胞株冻融的原则是什么？ 5．大量制备单克隆抗体的方法有哪些，各有哪些优缺点？ 6．单克隆抗体的性质鉴定的方法有哪些？ 7．叙述单克隆抗体的制备流程和应用。 8．叙述基因工程抗体的概念和优点。 下次课 预 习 要 点 凝集反应的概念和类型 实 施 情况及 分 析 教学实施顺利、圆满完成。