卵母细胞、GDF-9及TGF-β,1在大鼠PCOS中的局部作用-妇产科学专业论文.docxVIP

卵母细胞、GDF．9fltTGF。Bl在大鼠PCoS中的局部作用暨南大学附属第一医院妇产科学教研室 卵母细胞、GDF．9fltTGF。Bl在大鼠PCoS中的局部作用 暨南大学附属第一医院妇产科学教研室 博士研究生 苗竹林 导 师 王自能教授 中文摘要 目的： 以脱氢表雄酮诱导的多囊卵巢综合症(polycystic ovary syndrome。PCOS)大鼠为 研究对象，探讨卵母细胞、GDF．9及TGF—t31在PCOS大鼠卵巢卵泡囊状变性、间质 纤维化、包膜增厚、优势卵泡形成障碍以及激素水平变化等方面的作用机制。 方法： 1．利用脱氢表雄酮(dehydroepi androsterone，DHEA)皮下注射的方法复带IJPCOS病 理模型。并采用下列方法来验证模型：微粒子酶免分析法测定血清激素水平，包括血 清雌二醇(E2)，睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、LH／FSH、空腹 胰岛素(FrNS)值；HE染色方法观察PCOS大鼠卵巢的病理结构；透射电镜技术观察 PCOS大鼠卵巢超微结构的变化。 2．采用透射电镜技术观察PCOS组(肝8)与对照组(M=8)卵泡卵母细胞的超微结 构变化。 3．采用免疫组织化学方法检测PCOS组(n_20)与对照组(胪20)，大鼠卵巢生长 因子GDF一9、TGF—B】的表达，并进行图像分析。 4．采用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction． RT-PCR)法检测PCOS组(舻8)与对照组(萨8)生长因子GDF．9受体BMPR．JI， 以及TGF一131受体T8R 以及TGF一131受体T8R I、T[3RIImRNA的转录，通过凝胶图像分析系统对PCR产物 进行半定量分析。 5．采用免疫组织化学方法检测PCOS组(”=20)与对照组(月=20)信号蛋白Smad42 的表达；应用半定量RT-PCR法检测PCOS组(=8)与对照组(=8)Smad4和Smad7 基因的转录，通过凝胶图像分析系统对PCR产物进行半定量分析。 结果： 1．PCOS组血清T值、E2值、空腹胰岛素水平显著高于对照组(P0．05)。病理切片检 查可见卵巢囊性扩张卵泡和闭锁卵泡增多，颗粒细胞层数减少，卵泡膜细胞层增厚， 绝大多数未见黄体形成。细胞超微结构显示间质中胶原纤维增多，卵泡膜一间质细胞 中，线粒体、滑面内质网等细胞器丰富，脂滴明显增多。 2．透射电镜技术表明：窦前卵泡和窦状卵泡卵母细胞的胞浆细胞器、微绒毛以及围 绕其周围的颗粒细胞出现了一系列变性、坏死变化，PCOS组异常的窦前和窦状卵母 细胞数显著多于对照组‘P0．01)。 3．细胞因子在卵巢中的表达变化：与对照组相比，GDF一9在PCOS中的表达强度差 异无统计学意义(尸O．05)：而TGF．Bl在PCOS窦状卵泡膜细胞及间质中的表达强度 显著增高(P0．01)。 4．与对照组相比，GDF一9受体BMPR—IImRNA在多囊卵巢(polycystic ovary syndrome． PCO)中的转录显著增高(尸O．05)，TGF—Bl受体T13RI、T[3RIImRNA在PCO中的 转录也显著高于对照组(P0．01)。 5．与对照组相比，信号蛋白Smad4在PCO间质的表达显著增高(P=O．05)，Smad4 mRNA及Smad7mRNA在PCO中的转录也显著增多(尸O．05)。 结论： 1．从血清学变化结果、HE病理染色结果以及卵巢超微结构变化等方面，证实模型复 制成功。 暨煎盔堂2螋2錾蝗土坐焦迨噩 暨煎盔堂2螋2錾蝗土坐焦迨噩 主墓』撞要 2．卵母细胞结构的变化是PCOS特殊形态变化的基础。卵母细胞凋亡是卵泡闭锁的 基础，而卵母细胞坏死是PCOS卵泡囊状变性的主要原因。 3．GDF．9对PCOS中正常卵泡的生长发育具有调节作用，并对维持PCOS中卵泡膜一 间质细胞发育、雄激素的产生具有重要作用。 4．PCOS卵J巢GDF．9受体BMPR．II及信号蛋白Smad4与Smad7表达上调，使GDF．9诱 导雄激素产生的功能增强，并对GDF．9调节卵泡发育及排卵的功能产生影响。 5．多囊卵巢中TGF—pl表达异常是导致多囊卵巢间质纤维化，包膜增厚的主要原因： TGF-Dl也参与PCOS卵泡发育、闭锁的调控；与PCOS类固醇激素分泌紊乱有关。 6．多囊卵巢中TGF—p1作用的受体、信号蛋白Smad4和Smad7表达上调，使TGF．DI 致纤维化作用加强、影响TGF—Bl对卵泡发育的调节作用。 关键词： 生长分化因子一9，转化生长因子一pI，多囊卵巢综合症，卵母细胞，超微结构， 受体，信号蛋白，纤维化 111 The The Local Role of Oocyte，G