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小鼠肝糖原的提取与鉴定实验报告(共8篇) 　　肝糖原提取、鉴定实验流程　　吸取1ml量溶液时使用可调微量移液器，吸取1ml以上量溶液时使用刻度吸量管。　　鸡肝约g，剪碎　　＋5%CCl3COOH1ml　　＋5%CCl　　3COOH3ml　　3分钟　　3ml）　　＋3ml95%乙醇，混匀，静置10分钟　　4000r/min）　　＋蒸镏水1ml　　沸水浴2分钟，溶解沉淀　　糖原溶液1ml　　＋浓HCl5滴　　2　　2滴滴　　＋班氏试剂4滴　　2分钟，观察变化　　肝糖原定量实验流程　　鸡肝g　　＋　　30%KOH　　沸水浴15分钟　　取3支试管，按下表操作。试剂蒸馏水　　标准葡萄糖溶液糖原提取液%蒽酮溶液　　空白管——　　标准管——　　样品管——　　混匀，沸水浴10分钟，冷却c。在分光光度计620nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度。　　饱食鸡肝的肝糖原含量为：2～3g/100g肝组织　　生物化学实验报告　　姓名：　　学号：　　专业年级：XX级临床医学　　组别：第2实验室　　生物化学与分子生物学实验教学中心　　实验名称肝糖原的提取、鉴定、分离实验日期XX-12-25合作者评分　　陈海玲　　教师签名　　实验地点　　第2实验室　　指导老师朱利娜　　批改日期　　一、实验目的　　1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。　　2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。　　3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。4、熟练运用溶液混匀的各种方法。5、正确掌握溶液转移的操作。6、正确操作使用分光光度计。　　二、实验原理　　?肝糖原的提取　　糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。?糖原的鉴定　　糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。CuSO4+2NaOH=Na2SO4+Cu(OH)2Cu(OH)2+C6H12O6=2CuOH+氧化型葡萄糖+H2O　　2CuOH=H20+Cu2红色)Cu(OH)2====H2黑色)?肝糖原的定量　　糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在10—100mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。　　三、实验材料　　?仪器：　　1、普通离心机，室温-100℃恒温水浴箱，722型分光光度计，精度为10mg级电子天平2、剪刀、镊子、研钵3、试管架，离心管，试管　　4、刻度吸量管，1000μl微量可调取液器5、100ml容量瓶6、白瓷反应板?试剂：　　鸡肝、95%乙醇、/L(5%)三氯醋酸溶液、/LNaCl溶液、浓HCl、/L(50%)NaOH、碘试剂、班氏试剂、30%KOH溶液、标准葡萄糖液蒽酮显色剂　　四、实验步骤　　?肝糖原的提取　　鸡肝约，剪碎　　+5%CClCOOH1ml　　3　　研磨至乳状　　+5%CCl3COOH3ml研磨成肝匀浆　　全部转入离心管中，离心3min　　取上清液　　+5ml95%乙醇，混匀，静置10min离心5min　　取沉淀+蒸馏水2ml　　沸水浴2min，溶解沉淀　　+浓HCl　　15min，冷却　　糖原溶液　　呈色对比　　+班氏试剂(4d)　　混匀　　沸水浴，观察变化?注意事项：　　1、提取肝糖原时，向上清液中加入等量的95%乙醇后，必须混匀。由于上清液为水溶液，比重大于95%乙醇，溶液分成两层。加之上清液已4ml多，加上等量　　乙醇，总量接近9ml，混匀操作比较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。　　2、糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。葡萄糖残基在20个以下的会使碘呈现红色，20-30个之间使碘呈现紫色，60个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分支链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下，吸附碘后呈现红棕色。　　3、糖原水解液中鉴定葡萄糖时