分子实验室、细胞实验室常用配方.docVIP

PAGE 2 PAGE 2 （一）WB相关试剂及常用缓冲液 RIPA（100mI）（最后要调pH为7.4） 终浓度 分子量 称取 Tris-HCI(pH7.4) 50mM 121.14 605.7mg NaCI 150 mM 58.44 876.6mg TritonX-100 1% 1mI 脱氧胆酸钠 1% 1g EDTA 1 mM 292.248 29.2248mg SDS 0.1% 0.1g PMSF（100mM） 使用时每1ml加10ul 10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度） AP粉末 1g ddH20 10ml 10％SDS（十二烷基硫酸钠）： SDS粉末 10g ddH20定容到 100ml 注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡 6X蛋白质sample buffer Tris-HCl(1M,pH6.8) 30mL SDS 10g 甘油 30mL DTT（154.25） 9.3g 溴酚蓝 0.06g dd H20 定容至100mL 10XPBS缓冲液的配制： NaCl 80g KCl 2g Na2HPO4 14.4g（十二水合36g） KH2PO40 2.4g 加800 mLddH2O,根据开始的pH用NaOH或HCL调pH到7.4，调好pH再定容到1升。配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度 PBST(1X) PBS(1X) 500ml Tween 20 500μl 50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液配制1L溶液各成分的用量 Tris粉末 242g 冰醋酸 57.1ml Na2EDTA·2H2O 37.2g ddH20定容到 1L 封闭液 脱脂奶粉 5g 叠氮钠 0.02g(现配现用时可不加) PBS 定容到100mL 染色液(室温) 1L 500ml 200ml 100ml 甲醇 500mL 250 100 50 乙酸 100 mL 50 20 10 R250考马斯亮蓝 0.5g 0.25 g 0.1 g 0.05 g H20 400 mL 200 80 40 脱色液：(室温) 甲醇 165mL 乙酸 50 mL H20 785 mL 8.8Buffer:（调pH至8.8,4度保存） 100ml 200ml Tris 18.17g 36.34g 10%SDS 4mL 8ml ddH20 定容至100mL 200ml 6.8 Buffer: （调pH至6.8,4度保存） 100ml 200ml Tris 6．06g 12.12g 10%SDS 4mL 8ml ddH20 定容至100mL 200ml 转移缓冲液（10×trans buffer）：（常温保存） 1L 2L 甘氨酸 144g 288g Tris粉末 30.3g 60.6 ddH20 定容至1L 定容至2L 使用时甲醇 200mL 转移缓冲液（10×） 100 mL ddH20 700 mL 电泳缓冲液（10×）(running buffer)：（常温保存） 1L 2L 甘氨酸 144g 288g Tris粉末 30.3g 60.6 SDS 10g 20g ddH20 定容至1L 定容至2L 10Х)TBS: （常温保存） NaCl 80.0g Tris粉末 24.2g ddH20 定容至1L TBST(1X) TBS(1X) 500ml Tween 20 500μl Stripping buffer(可反复利用)温老师组配方 10%SDS 10ml Β-巯基乙醇 350?l Tris-HCI（pH6.8） 6.25ml（6.06加到50mL水） 加入ddH2O