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动物细胞工程 思考与回忆： 1.动物细胞全能性特点？ 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 2.能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？ 不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。 定义： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） 液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。 主要有： 营养物质（糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子） 动物血清（10%～20%）等 根据细胞的生理生化代谢特点,人工配制而成,为细胞提供一个近似体内生存环境,又便于控制和标准化操作 基本成分 各种碳水化合物(糖)、氨基酸、维生素、无机盐、生长因子、激素等 常用培养液 几十种 植物组织培养和动物细胞培养的比较： 比较以下细胞的全能性： 受精卵、二分裂球的子细胞 囊胚细胞、多能造血干细胞 单能造血干细胞、 水螅的消化细胞、人的消化细胞 动物难以克隆的原因 动物的基因组中，一类基因是维持生存的，在各种细胞中都处于活动的状态。另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。 分化的细胞内基因的活动很不完全，因此很难像受精卵那样发挥细胞全能性。 胚胎细胞克隆比高度分化的体细胞克隆要容易得多。 定义： 指用自然或人工方法，使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。 不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。 诱导融合的因素： 生物法：灭活的仙台病毒诱导融合。 利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。 化学法：聚乙二醇诱导融合 因为聚乙二醇易得、简便，且融合效果稳定，是目前应用最广泛的方法。 物理法：离心、振动、电刺激 动物细胞融合技术的应用 遗传学上：基因定位 由于细胞杂交中染色体容易丢失，因此利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物（蛋白质）减少的对应关系，可以进行基因定位。 例如：人-鼠杂交细胞通常丢失人的染色体，可以进行人类基因的定位（如由于1号染色体丢失导致尿苷单磷酸激酶活性丧失，可知该基因位于1号染色体上） 免疫学上：利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 1、单克隆抗体作为诊断试剂,在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有特异性强,灵敏度高等特点. 2、单克隆抗体上连接抗癌药物,治疗癌症等疾病(生物导弹) 5.体细胞核移植技术的应用前景 6.体细胞核移植技术存在的问题 看书P49-50页 三、动物细胞融合 动物细胞融合 用 途 诱导方法 细胞融合的方法 植物细胞全能性 细胞融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 使细胞分散后 诱导细胞融合 物理（离心、振 动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 获得杂种植株 主要用于制备 单克隆抗体 回忆： 1、抗体的化学本质？ 球蛋白 2、抗体是由何种细胞产生的？ 效应B细胞 3、抗体主要分布在哪？ 血清 4、抗原的特异性取决于什么？ 抗原决定簇 5、抗原决定簇的种类和数目是否相同？ 不同 动物细胞融合的成功应用 ——单克隆抗体的制备 一种抗原只能与相应的抗体发生特异性结合。 6、抗原与抗体的关系？ 一个抗原可以与多个抗体特异结合 4 脾脏 4种效应B细胞 B1 B2 B3 B4 抗原 B1 B2 B3 B4 Ab1 Ab2 Ab3 Ab4 4种特异性抗体 问题情境1： 长期以来，人们为了获得抗体，采用的就是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。 你认为这种做法有什么弊端？ 产量低，而且机体会产生多种抗体，抗体纯度低，反应不够灵敏，这种情况给临床医学的诊断与治疗带来诸多不便。 问题情境2： 每个浆细胞只分泌一种特异性抗体，要想获得大量专一性抗体，你能利用前面学习过的动物细胞工程的有关技术来解决问题吗？ （1）用单个特定B淋巴细胞进行无性繁殖，形成大量的细胞群体，即克隆。 （2）如此克隆出的B淋巴细胞遗传特性高度