酪氨酸蛋白磷酸酶调节蚕豆气孔运动的证据及其机制-植物学专业论文.docx

中文摘要Ser／Thr和Tyr磷艘化也：动物和酵母细胞的生长发育过稗中都起重要的作刚，但在植物细胞中 中文摘要 Ser／Thr和Tyr磷艘化也：动物和酵母细胞的生长发育过稗中都起重要的作刚，但在植物细胞中 仅确立了Ser／Thr磷酸化作用。剑目前为止，植物细胞中还没有发现典型的酪氨酸堑自激酶(Protein tyrosine kinase，PTK)，囡而忽视了对植物体内酪氮酸磷酸化作用的研究。最近的资料表明植物体 内确实存在一些酪氨酸磷酸化蛋白(Phosphotyrosyl protein，PYP)和酪氨酸蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphatases，PTPases)，囡此在植物体内确立酪氨酸磷酸酶的功能具有重要意义。 植物叶片表皮细胞上的气孔是由围绕小孔周围的一对保‘p细胞组成的。气孔的开和关卜要是 通过人量的离子流进出保卫细胞使其膨压改变而调节的，它己成为研究植物细胞信号转导的一种 模式材料。由丁保卫细胞和周围表皮细胞不同，能够对各种内源信号和外界刺激产生迅速而川逆 的反应，使植物能够适应环境，优化生长，因此保卫细胞的信号转导引起人们的浓厚兴趣。本研 究以蚕豆叶片气孔保卫细胞为材料对PTPases参与气孔运动的调控及其作用机制进行了探索。 保『i细胞质膜H+．ATPase在调节气孔张开的过程中起着关键的作用，但芙’『-其抑制利NaVO、 在抑制气7L张开方面存在一些矛盾的结果。在实验中．我们观察到NaVO，儿乎不能抑制光诱导 的蚕可气孔张开，却可以抑制黑暗和ABA诱导的气孔关闭。由于气孔开放是通过H+-ATPase的 激活而不是抑制实现的，所以NaVO]对黑暗和ABA诱导的气孔关闭的抑制作崩显然]i是f{j r对 H+-ATPase抑制的结果。鉴于NaVO]是哺乳动物系统中PTPases的抑制剂，最近的资料证明侄}fL 物中也存在PTPases，那么NaV03对气孔运动的调节不同结果是否通过对PTPases活性渊＼?实现 的呢?奉实验观察到PTPases专一性抑制剂，氧化苯胂(phenylarsine oxide，PAO)对’e孔运动 的影响与NaVO，有类似的效应，但其对气孔运动的调节作用比NaV03要强烈的多。PAO可以抑 制黑暗和ABA诱导的气孔关闭效应，并且可以使已经关闭的气孔重新张开。但PAO对光诱导的 气孔张开几乎没有影响。二价zn”作为盯P∞es的一种抑制剂也可以部分抑制黑暗和ABA诱导 的气孔关闭过程。实验结果初步证明PTPases参与蚕豆气孔关闭信号过程的调控。 在蚕豆表皮检测到的PTPases酶活性：该酶活性晟适pH在6．0-7．0之间，pH超过7．5，其活 性大大降低：PAO和NaV03都可抑制该酶的活性；不同浓度的二价金属离子ca”和Mg”对蚕豆 表皮细胞中的PTPases几乎没有任何影响，但不同浓度的zn”可以抑制其酶活性，这一结果与Zn’ 作为PTPases一种抑制剂，抑制ABA和黑暗诱导气孔关闭效应相一致。氧化还原条件也影响蚕 且表皮细胞的PTPases酶活性：PAO和H202都可以有效抑制蚕豆表皮PTPases的活性，加入还 原剂D，rr不能减弱PAO对PTPases的抑制作用，但可以解除H202对PTPases的抑制作用，H口 H202可使PTPases发生可逆失活。 PTPases作只：i的底物应该是一些酪氨酸磷酸化的蛋白。使用anti．phosphotyrosine antibody PT．66对保卫细胞中酪氮酸磷酸化蛋白进行的免疫荧光和免疫胶体金电镜定位的结果表明，在保 卫细胞的细胞核、胞质、液泡、质膜和n}．绿体中都有酪氨酸磷酸化蛋白的分布，其中细胞核和叶 绿体中分布较多。表明PTPases对气孔运动的影响是多条途径相互交叉综合作用的结果。 }b02足ABA诱导气iL关闭的下游信号组分之一，但是对保卫细胞是如何调节并感知ABA 滂导H202的产生这一信号过程的细节知之甚少。PTPases专一性抑制剂PAO不仅阻lh ABA或 H202诱导的蚕豆气孔关闭，也可以使ABA或H202诱导关闭的气孔重新张开，说明PTPases可能 H202诱导的蚕豆气孔关闭，也可以使ABA或H202诱导关闭的气孔重新张开，说明PTPases可能 JE H，O，的下游调节ABA诱导的蚕豆气孔关闭过程。PAO也可抑制ABA诱导的蚕豆保卫细胞中 H202的产生，MAPK专一性调节ABA诱导保卫细胞中H202的产生，不论在动物还是植物中， MAPK部足PTPases作川柏一个主要}5巴侮，推测PTPases llI以通过对MAPK的作用柬调控ABA 诱导的H202的产生。 奉研究中我们证明NaV03对气孔运动作用的矛盾实验结果可能是其影响PTP＆ses的原吲； PTPases主要参与