家兔DIC实验报告.doc

实验2 急性DIC 实验时间：5月23日 【实验目的】 1、学习复制急性DIC动物模型的方法。 2、了解实验室诊断DIC的常用方法及其意义。 3、结合实验和血液学指标测定结果，联系理论知识加深理解DIC的病因及发生机制。 【实验对象】 家兔1只，雌（未孕）雄均可。体重 1.5～2.0 kg。 【药品和试剂】 1%普鲁卡因、3.8%枸椽酸钠液、2%兔脑粉浸出液（临用时配制）、饱和氯化钠液、生理盐水、1%鱼精蛋白液。 【实验器材】 兔台、哺乳动物手术器械一套（包括手术刀、普通剪刀、眼科剪刀、止血钳）、电热恒温水浴箱、台式离心机、721分光光度计、秒表、刻度离心管（10ml）、试管（13×75mm、15×100mm）、刻度吸管（2ml、5ml）、试管架、微量定量移液器（10μl、50μl、500μl）、橡皮吸球、乳胶滴管、玻片、棉球、纱布、颈动脉插管（硅胶管）2根、动脉夹，注射器。 【实验方法】 1、将家兔仰位固定兔台、颈部剪毛、皮下1%普鲁卡因局部浸润麻醉，作正中纵切口（约3~4cm左右），常规暴露一侧颈总动脉，结扎其远心端，近心端用动脉夹夹闭；在结扎线下方剪口插入硅胶管并固定，松夹放血7ml至盛有3.8%枸椽酸钠液2ml的10ml刻度离心管中，立即混匀离心（3000rpm，5分钟），分离血浆，备作纤维蛋白原定量与3P试验。再松动动脉夹放血2~3滴于洁净玻片上，作凝血时间测定。 2、复制DIC模型：用10ml注射器吸取2%兔脑粉浸液，按3ml/kg的量缓慢（以每分钟2ml的速度为宜）注入家兔耳缘静脉内，同时观察其反应，如出现呼吸急促、躁动不安，即停止注射，速行第二次采血（方法同1），如未出现反应可注射毕后采血。重复上述各项指标测定。 4、整理并分析实验结果。 【附 录】 1、凝血时间测定（玻片法）：放血2~3滴于洁净玻片上，同时按动秒表，用清洁废针头挑拨血滴，见有明显血丝出现，迅即停表，记录时间。 2、纤维蛋白原含量测定（饱和盐水法）：取15×100mm试管一支，置0.5ml样本血浆，加入饱和氯化钠溶液4.5ml，立即混匀，于37℃水浴中孵育3分钟取出，再混匀后以721分光光度计，520nm滤光板比浊，读取光密度值；以生理盐水替代饱和氯化钠液作同样操作后为空白对照管调零，测出光密度，按下式计算； 3、3P试验：取13×75mm试管一支，置0.5ml血浆，加入1%鱼精蛋白液0.05ml，轻轻摇匀，于37℃水浴中15分钟后取出，于黑色背景下观察，如见絮状沉淀或胶冻状即为阳性，清澈则为阴性。 【实验结果】 组别 CT(min) 3P test OD520nm Fbg(mg/dl) OD520nm Fbg(mg/dl) 正常 注射后 正常 注射后 N测 D测 1 / / / / / / / / 2 1’32 6’18 - - 0.186 372 0.095 190 3 0’22 1’22 - + 0.205 410 0.093 186 4 0’55 0’50/1’40 - +++ 0.248 496 0.112/0.116 224/232 5 1’20 2’20 - +++ 0.120 240 0.102 204 6 0’24 / - - 0.231 462 0.042 84 【讨论】 1、家兔实验性DIC的致病原因： 兔脑脊液属于组织因子，大量的兔脑脊液静脉注射后，激活家兔的外源性凝血系统，启动凝血过程，依次激活凝血因子FIX,FVIII,FX等和凝血酶，从而使血小板聚集，使纤维蛋白原变成纤维蛋白，促进凝血。此外，凝血酶反馈性激活FIX,FX,FXI,FXII等，扩大凝血反应。此为高凝期，微循环易形成广泛的微血栓。 大量凝血酶的激活和微血栓的形成，大量消耗了血液中的凝血因子和血小板，可能继发性激活纤溶系统，造成凝血系统和纤溶系统不平衡，血液处于消耗性低凝期，有明显出血症状。 DIC时产生的大量凝血酶和FXIIa等激活纤溶系统，产生大量纤溶酶，导致纤溶亢进，形成大量纤维蛋白降解产物，抗凝作用明显，为继发性纤溶亢进，此时出血十分显著。（厉彬杰） 2、CT测定的原理：新鲜血液离体后，因子被异物表面（玻璃）激活，启动了内源性凝血。由于血液中含有内源性凝血所需的全部凝血因子、血小板及钙离子，血液则发生凝固。血液凝固所需时间即为凝血时间（clotting rime，CT）。 3、由实验结果分析， 3.1发生DIC后，凝血时间变长。 机制：凝血物质被消耗而减少：在DIC发生、发展过程中，大量血小板和凝血因子被消耗，使得血液中纤维蛋白原、凝血酶原、FⅤ、FⅧ、FⅩ及血小板明显减少，使凝血过程发生障碍。 纤溶系统激活：血液中FⅫ激活的同时，激肽系统也被激活，产生缓激肽酶，使纤溶酶原变成纤溶酶，激活纤溶系统。纤溶酶除了可使纤维蛋白降解