光合自养缺陷型小球藻的筛选及生物能源应用.PDF

中国科学: 生命科学 2014 年 第44 卷 第10 期: 1043 ~ 1050 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 中国知名大学及研究院所专栏 清华大学专辑 光合自养缺陷型小球藻的筛选及生物能源应用 * * 村上达哉, 卢悦, 戴俊彪 , 吴庆余 清华大学生命科学学院, 教育部生物信息重点实验室, 北京 100084 * 联系人, E-mail: jbdai@; qingyu@ 收稿日期: 2014-09-02; 接受日期: 2014-09-22 国家科技支撑计划(批准号: 2011BAD14B05)、国家高技术发展计划(批准号: 2014AA02200)、国家自然科学基金(批准号: 和 和清华大学自主科研(批准号: 2012Z08128)资助项目 doi: 10.1360/052014-147 摘要 小球藻Chlorella protothecoides(C. protothecoides)是潜在的、可用于工业生产 关键词 生物柴油的高产油微藻. 本研究通过体外诱变的手段, 获得了一株完全不能进行光合 叶绿素 突变体 自养生长的突变体Al64. 利用尼罗红染色和叶绿素自发荧光分析和电子显微镜分析细 Chlorella protothecoides 胞的亚显微结构, 结果显示该突变体中叶绿体严重退化, 其中类囊体膜结构缺失, 导 类囊体膜 致该突变体缺乏叶绿素, 无法进行光合自养生长. 在富糖富氮的培养条件下, 该光合 油脂生产能力 自养缺陷型突变体的细胞密度和油脂含量比野生型细胞分别高5.54%和 6.76%, 分析 生物柴油 还发现, 该突变体产油能力为0.158 g L1 h1, 比野生型提高12.8%. 本文通过缺失光 合作用突变体的构建, 在异养高氮条件下实现了生物量及细胞内油脂含量的同步提 高, 为进一步提高微藻生产生物柴油的产量提供了新的研究平台. 随着全世界对石油需求的扩大, 替代化石燃料 生长, 是一个潜在的工业化生物柴油生产藻株. C. 的液体生物质燃料包括生物柴油和生物乙醇的研发 protothecoides 的生物量在异养条件下比自养条件下 受到了越来越广泛的关注[1]. 过去的几十年中, 开展 高很多, 导致最终产油量明显提升[7~9]. 因此, 借助 了许多利用高等植物生产生物柴油的研究, 诸如利 异养条件来提高微藻产油量是非常重要的途径. 用大豆、油菜、棕榈树、麻风树以及其他油含量高的 异养C. protothecoides 细胞高油脂含量需要限氮 植物生产生物柴油[2~4]. 由于高等植物生长周期长、 的环境, 而限氮同时也将影响细胞的快速生长, 导致 产油量低以及种植需要大量的土地, 故从高等植物 最终油脂产量的降低. 根据以往的报道, C. protothe- 中可获取的油量是有限的[5]. 相比高等植物在生产生 coides 的油脂产量在富氮的环境中大约是在低氮环 物柴油方面的这些弱点,