九免疫荧光染色观察肿瘤细胞骨架.pptVIP

* 免疫荧光染色观察肿瘤细胞骨架 实验九 实验目的与要求 掌握免疫荧光技术的基本原理; 了解免疫荧光技术在生命科学中的广泛应用. 一、实验的基本原理 荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。 抗体能特异性地识别相应的抗原，并与之结合。这种结合在体外也能发生，这种特性就是许多免疫检测方法的基础。 荧光技术与免疫技术的结合可用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。 三、试剂与器材 人肿瘤细胞涂片 甲醇、H2O2、滤纸、PBS、正常羊血清封闭液、一抗、 FITC标记的IgG、甘油/PBS封片剂、盖玻片 荧光显微镜 玻片细胞置于甲醇中-10℃固定5min，室温凉干（或冷丙酮固定5min，室温凉干）；PBS漂洗2min×3次；3% H2O2室温孵育10min（以去除细胞内源性过氧化物酶活性）；PBS漂洗5min×3次；10%正常羊血清封闭液（0.1M PBS配制）室温封闭20min；弃封闭液（此步骤不必PBS洗涤）； 四、实验步骤 用适当比例稀释的一抗（一般稀释比为1:100-1:200）37℃孵育1h（或4℃孵育过夜）；PBS漂洗5min×3次；用适当比例稀释的二抗