利用可示踪转基因斑马鱼研究原始造血和定向造血的关系及斑马鱼细胞移植方法的建立-免疫学专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 利用可示踪转基因斑马鱼研究原始造血和定向造血的关系 专业：免疫学 研究生：黄波 导师：何志旭教授 舒莉萍副教授 摘 要 目的 本课题利用已建立的可示踪的转基因斑马鱼系 TG （zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP) 和 TG(zC-myb:EGFP)，通过实时跟踪观察， 从而动态观测原始造血干细胞和定向造血干细胞的迁移过程，以期了解斑马鱼 原始造血和定向造血的关系，为进一步研究斑马鱼血液系统发育提供可能的理 论依据。方法 分别收集红色荧光蛋白（DsRed）标记原始造血干细胞的转基因 系 TG（zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP)和绿色荧光蛋白（EGFP）标记定向造血 干细胞的转基因斑马鱼系 TG (zC-myb:EGFP)自交和侧交的斑马鱼胚胎，于 12hpf(hours post-fertilization，hpf)去卵膜，进行局部麻醉，利用激光共聚焦显微镜 对全胚胎进行连续实时的动态扫描,从 12hpf 开始观察，直至 48hpf,期间每隔 两小时拍摄一次进行追踪观察。结果 （1）红色荧光蛋白（DsRed）标记原始造 血干细胞的转基因系 TG（zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP)自交后，观察胚胎发 现 lmo2+的细胞在 14hpf 开始表