流式细胞技术与流式细胞仪.pptVIP

本章内容提要 概述 第一节 流式细胞仪的工作原理 第二节 流式细胞仪的分类和基本结构 第二节 流式细胞仪的分类和基本结构 一、流式细胞仪的分类 流式细胞仪根据功能不同可分为临床型和科研型。 临床型只有分析功能，没有分选功能，操作简便，易学易掌握。 科研型既有分析功能又有分选功能，可快速将所感兴趣的细胞分选出来。 第二节 流式细胞仪的分类和基本结构 一、流式细胞仪的分类 流式细胞仪根据其结构不同又可分为一般流式细胞仪和狭缝扫描流式细胞仪。 前者的光斑直径大于被检细胞体积，只能提供细胞内某种生物化学成分的参数。 第二节 流式细胞仪的分类与结构 狭缝扫描流式细胞仪 第二节 流式细胞仪的分类和基本结构 第二节 流式细胞仪的分类和基本结构 第三节 流式细胞仪的主要性能指标 第三节 流式细胞仪的主要性能指标 第三节 流式细胞仪的主要性能指标 第三节 流式细胞仪的主要性能指标 第三节 流式细胞仪的主要性能指标 第三节 流式细胞仪的主要性能指标 第四节 流式细胞仪应用的技术要求 第六节 流式细胞仪的临床应用 本章小结 本章简要介绍了流式细胞术和流式细胞仪的基本概念。 论述了流式细胞仪的基本原理、流式细胞仪的分类和基本结构、主要性能指标、操作技术的质量控制、流式细胞仪的维护及常见故障的排除以及流式细胞仪的临床应用。 五、流式细胞仪在AIDS病检测中的分析 流式细胞术用于AIDS免疫功能的检测 是最重要的检测手段，采用三参数荧光标 记计数可对T淋巴细胞及亚群进行分析， 并通过动态监测T细胞亚群可以对HIV感染 者或AIDS发病者进行区别。 六、FCM对自身免疫性疾病HLA抗原的分析 利用FCM可以进行HLA-B27／HLA-B7 双标记抗体检测HLA-B27阳性细胞，同时 又可排出交叉反应。通常58％～97％的 强直性脊柱炎患者可检出这种抗原，而 正常人仅2％～7％可检出这种抗原。FCM 检测HLA-B27快速、特异、敏感，为强制 性脊柱炎的临床诊断提供了有力的帮助。 七、流式细胞仪在药物学方面的应用 流式细胞仪在检测药物在细胞中的分 布，研究药物的作用机制方面应用广泛。 亦可用于筛选新药，如化疗药物对肿瘤细 胞的凋亡机制，可通过测DNA凋亡峰， Bcl-2凋亡调节蛋白等进行观察。 （四）信号检测与分析 2.荧光信号 （1）荧光信号线性测量和对数测量 线性放大器的输出与输入是线性关系，细 胞DNA含量、RNA含量、总蛋白质含量等的 测量一般选用线性放大测量。在细胞膜表 面抗原等的荧光检测时通常使用对数放大 器。 （四）信号检测与分析 2.荧光信号 （2）荧光信号的面积和宽度 荧光信号的面积是采用对荧光光通量进 行积分测量，一般对DNA倍体测量时采用 面积，这是因为荧光脉冲的面积比荧光 脉冲的高度更能准确反映DNA的含量。 荧光信号的宽度常用来区分双连体细胞。 （四）信号检测与分析 2.荧光信号 （3）光谱重叠的校正 当细胞携带两种荧光受激光激发而发 射两种不同波长的荧光时，理论上可选择 滤片使每种荧光仅被相应的检测器检测， 但由于目前所使用的各种荧光染料都是宽 发射谱性质，虽然它们之间发射峰值各不 相同，但发射谱范围有一定的重叠。 从右图中可以看 出，阴影为探测器检 测光谱的范围，FITC 探测器会探测到少量 的PE光谱，而PE探测 器则检测到较多的 FITC光谱。 图中点A通过透镜f 成像在A’处，而点B通 过透镜f成像在B’处。 在光电倍增管前放上一 小孔，作为空间滤波器， 排除其它杂散光信号， 从而确保了A点光源进不 了B’点处，B点光源也 进不了A’点处。 （五）细胞分选器 1．小水滴的形成 压电晶体带动流动室振动，液流形成水滴。 喷嘴的振动频率即每秒钟产生水滴的 数目。当喷嘴直径为50μm时，信号频率 为40kHz，则每秒钟产生4万个水滴。若每 秒钟流出的细胞是1000个，则平均每40个 水滴中只有一个水滴是有细胞的，其他皆 为空白。 （五）细胞分选器 2．逻辑电路 为了分选细胞，需要细胞在经过测量 区时判断出哪个细胞满足了分选的条件， 并产生一个逻辑信号，此信号驱动充电脉 冲发生器，使之产生充电脉冲。 （五）细胞分选器 3．水滴的充电与偏转 当水滴从流束上将要断开时给整个流 束充电，则水滴从流束上断开后便带有同 极性的多余表面电荷。下落的水滴通过一 对平行板电极形成的静电场时，带正电荷 的水滴向带负电的电极板偏转，这样就可 用容器收集水滴。 （六）F