组织切片染色技术.pptxVIP

组织切片染色技术;学习目标;;一、染色的概念;二、染色的目的; 染色的物理作用 (1）毛细管作用及渗透作用 染色剂与组织细胞没有牢固的结合 (2)吸收作用：又称溶解学说。 组织吸收染色剂，牢固的结合。 组织的着色与溶液的颜色相同。;(3)吸附作用 是固体物质的特性，即较大的物体能从周围溶液(染液)中吸附一些小颗粒(化合物或离子)到自身的特性。 细胞中各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此能选择性地吸收不同的离子，即某种蛋白质对某种染色剂有吸附作用,而对别种染色剂无吸附作用，这就可以解释鉴别染色现象。 ; 染色的化学作用 染色剂按性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，而动、植物的细胞内一般也可区分为酸性(阴离子)和碱性(阳离子)部分。 当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳离子(碱性部分)较牢固地结合。 ;;进行性染色和退行性染色 进行性染色：组织成分着色由浅至深，当达到所需要的强度时，终止染色。 此种方法无需“分化”，例如，卡红染色。 退行性染色：是先把组织浓染过度，超过所需的程度，然后再用某些溶液脱去多余的染色剂，以达到适当的深度，并使不应着色的组织细胞脱色。 这个步骤称为“分化”。 ;直接染色，间接染色和媒染剂 直接染色：染色无需第三种物质参加，染色剂和组织即可直接结合着色。 间接染色：单独染料本身的水溶液或酒精溶液，几乎不能与组织细胞结合或结合的能力很弱，必须有第三种成分——媒染剂参与，才能使染色剂与组织细胞有效地结合起来。 媒染剂：通常是双价或三价金属如铝、铁的硫酸盐或氧化物。媒染剂在染色中起着架桥作用，既能与染料结合又能与组织相结合，达到了促进染色的效果。 ;促染剂 用以加强染料和组织细胞结合能力的物质称为促染剂 促染剂如化学反应中的催化剂，少量存在就有明显的促染作用。它们的作用机制也许是降低表面张力或是改变了染液的pH值。 ;分化剂 在退行性染色中，附在组织细胞上多余的染色剂需用某些特???的溶液把目的物以外的部分脱去，从而使目的物与周围组织形成鲜明的对比，同时使目的物本身的色泽也深浅适当。 这种选择性地除去多余染色剂的过程称为“分化”，所使用的溶液即“分化剂”。有酸性分化剂 、氧化分化剂 、媒染分化剂 ;变色反应和正色反应 变色反应：染色反应最后目的物所呈现的颜色和染色剂当初的颜色不同。如：黏液用甲苯胺蓝可染成红色，而其余组织则染成不同色调的蓝色。 正色反应：染色反应最后目的物所呈现的颜色和染色剂的颜色相同。如：酸性品红总是将组织染成不同色调的红色；淡绿染成不同色调的绿色。 ;四、染色剂;四、染色剂;四、染色剂;四、染色剂;四、染色剂;四、染色剂;五、常用染色术语 ;六、染色前后处理 ;六、染色前后处理;六、染色前后处理;六、染色前后处理;六、染色前后处理;七、染色的注意事项 ;;一、常规染色的概念 ;二、苏木素-伊红染色液的配制 ;二、苏木素-伊红染色液的配制;二、苏木素-伊红染色液的配制;二、苏木素-伊红染色液的配制;二、苏木素-伊红染色液的配制;;常规脱蜡;; 在染色后，重新进入酒精和二甲苯，最后用中性树胶封片，以便长期保存。 * 切片: 固定→梯度酒精上行→二甲苯→石蜡。 * 染色: 石蜡→二甲苯→梯度酒精下行→水。 * 保存: 水→梯度酒精→二甲苯→中性树胶。;* 苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性。;* 伊红是酸性染料，粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。被伊红着色的结构本身为碱性，具有嗜酸性。 * 不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性。;石蜡切片HE染色;;四、染色注意事项;4．分化十分重要。 5．还原液不宜过浓 6．伊红宜淡染，复染过深胞核会不清晰，影响镜检。 7．脱水、透明宜彻底 ;8．要将组织四周的污染物去掉 9．封固剂要适量 10．染好的切片标签贴牢，编号清楚，避光保存 ;Thank You!