分散蛋白B的研究进展.docVIP

PAGE PAGE 1 分散蛋白B的研究进展 　　【摘要】细菌自身合成的细胞外多糖是生物膜抵抗抗菌物质和宿主免疫成分的重要保护屏障，因此降解细胞外多糖或抑制其合成是目前研发抗生物膜药物的热点之一。分散蛋白B是近年来在牙周可疑致病菌伴放线嗜血杆菌生物膜中发现的一种β－己糖苷酶，具有降解细胞外多糖的作用，是一种潜在的临床抗微生物膜感染类药物。本文就分散蛋白B及其结构和作用机制以及应用等研究进展作一综述。 　　【关键词】分散蛋白；牙菌斑；牙周病；细胞外多糖；生物膜分散；抗微生物膜药剂 　　【中图分类号】Q55 　　【文献标志码】A 　　生物膜是细菌在不利于自身生存的环境条件下黏附于物体或活性组织表面并被自身产生的细胞外多糖（extracellular　polysaccharide，EPS）所包裹形成的一种与浮游细菌生长方式截然不同的微菌落，是细菌适应生存环境所形成的特殊结构。65％的人类细菌感染性疾病与生物膜形成有关，即生物膜是龋病和牙周病这两大口腔高发疾病的始动因素。生物膜一旦形成，细菌可对抗生素产生高度的耐药性，而这一高度的耐药性与EPS的多网状屏障结构密切相关。细菌释放的毒性成分刺激机体产生大量的特异性抗体及细胞因子，而EPS阻挡了这些免疫成分渗入生物膜，使其在感染局部形成免疫复合物，损伤周围组织，加重炎症破坏；因此，寻找一种可阻断EPS形成或者可降解EPS、破坏生物膜结构的新型药物的研究则备受关注。分散蛋白（dispersin，Dsp）B是一种近年来在牙周可疑致病菌伴放线嗜血杆菌生物膜中发现的具有降解EPS功能的β－己糖苷酶，本文就其最新的研究作一综述。 　　1　分散蛋白B 　　伴放线嗜血杆菌是一种与侵袭性牙周炎密切相关的牙周可疑致病菌，其所形成的附着稳固的菌斑生物膜，可抵抗洗涤剂、蛋白酶、热和超声等的清除作用；然而在生物膜主体结构附近，会逐渐形成新的非对称性和分散的独立菌落克隆。Kaplan等发现，成熟的伴放线嗜血杆菌菌斑生物膜向外释放的单独或成簇的细菌，牢固地附着在新的位点并形成新的菌落，从而促进生物膜的整体扩散。他们用其临床野生株CU1000N与同源变异株JK1002／JK1017／JK1022／JK1023进行比较发现，变异株可形成附着性生物膜，但却不能向周围递质中释放细菌。相关变异位点基因为rmlA、wzt、dspA和dspB，编码蛋白形成伴放线嗜血杆菌的O多糖（O　polysaccharide，O-PS）成分。应用重组质粒使rmlA、wzt、dspA和dspB基因在变异株中再次表达时，即可恢复合成O-PS、释放细菌和形成新生物膜的功能。这就提示，O-PS是伴放线嗜血杆菌成熟菌斑生物膜分散释放细菌的关键性因素。 　　有研究者将纯化了的dspB基因表达产物DspB蛋白加入培养基后，可以使JK1023变异株形成的生物膜恢复释放细菌的能力，DspB蛋白的这种作用不仅局限于伴放线嗜血杆菌生物膜，而且还对其他一些产聚-N-乙酰氨基葡糖（poly-N-acetylglucosamine，PGA）细菌的生物膜同样有效，如革兰阳性菌（葡萄球菌属）和革兰阴性菌（胸膜肺炎防线杆菌、大肠埃希菌、鼠疫杆菌、假单胞菌属）。尽管其他细菌，例如路邓葡萄球菌等的基因组中存在与伴放线嗜血杆菌dspB同源的基因，但目前尚未发现这些细菌可产生具有DspB功能的蛋白质。 　　2　分散蛋白B的结构和作用机制 　　2.1DspB的结构 　　DspB为一种相对分子质量4.0×104、包含361个氨基酸的可溶性β-PGA酶，可在一个较窄的pH范围内保持高度活性及稳定性。与人类及其他细菌的β-己糖胺酶相比较，DspB的结构相对简单，仅包含一个单链的结构域；但与α-螺旋或β-链折叠所形成的经典桶装结构不同，此单链结构域可进一步分为许多亚结构。DspB主要的亚结构1～60残基和91～358残基与糖基水解酶家族（glycoside　hydrolase　family，GHF）-20其他成员催化域的折叠相一致，提示DspB属于GHF-20。 　　尽管DspB与GHF-20其他成员的结构相似，但两者活性位点的各基团位置和构象却有明显的差异，因此在底物特异性、结合和水解以及产物的释放过程中存在着异同。DspB的作用底物为β-（1，6）-连接-PGA多聚体，GHF-20家族的β-己糖胺酶其他成员的作用底物则为β-（1，4）-连接-PGA多聚体。根据水解酶新命名法则，DspB的底物结合位点可分成+1还原端亚位点和-1非还原端亚位点。Kerrigan等通过对DspB晶体结构进行建模和生化分析发现，精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和酪氨酸以及色氨酸（tryptophan，Trp）216、Trp237和Trp330组成了-1亚位点，参与了催化反应和或底物结合的过程。 　　Manu