第一章-植物基因的结构及其表达调.ppt

第一章 植物基因的结构及其表达调控 自从孟德尔用不同表型的豌豆品种进行杂交试验以探探讨生物的遗传规律以来，一部遗传学的发展史反映了人类对基因不断深化认识的过程。特别在分子遗传学诞生以后，有关基因的结构、突变、表达、调节与克隆等方面的研究取得很大的进展。这不但帮助生物学各分支学科找到了深化自己研究问题的思路，同时也为解决医药与农业上的许多难题提供了新的技术与途径。但是目前对基因仍有许多不够了解的地方，还有许多基因尚未被克隆。这有待不同学科研究者的共同努力来完成。下面就近年有关植物中编码蛋白质的核基因的结构，以及表达调控方面的一些进展作一简单的介绍。 第一章 植物基因的结构及其表达调控 1. 基因的结构 1.1 5’上游区 1.2 5’非翻译区 1.3 编码区 1.4 3’非翻译区 2. 基因的表达调控 2.1 器官与组织专一性表达的基因 2.2 受环境因素诱导而表达的基因 2.3 基因表达的调节机理 1. 基因的结构 1.1 5’上游区 1.2 5’非翻译区 1.3 编码区 1.4 3’非翻译区 克隆植物中核基因的方法 在研究一个基因的结构之前，先要克隆到这个基因。目前常用来克隆植物中编码蛋白质的核基因的方法大致有以下几种： ①根据蛋白质中所测出的部分氨基酸顺序，合成一段与之相对应的由三联密码组成的寡核苷酸，以此寡核苷酸为探针，从该植物的基因组文库与cDNA文库中分别钓出编码此蛋白质的基因与cDNA克隆。 ②根据蛋白质中所测出的氨基酸顺序，合成一对或数对用于聚合酶链式反应(PCR)的引物，以植物总DNA为模板，扩增或分段扩增出所要克隆的基因或基因片段、再以此DNA片段为探针，从基因组文库与cDNA文库中分别钓出编码此蛋白的基因与cDNA克隆。 克隆植物中核基因的方法 ③如果基因的产物不明确或蛋白质不易提纯而无法测序，但是知道该基因突变后所出现的表型改变，则可用转座子标签法来分离基因，该法是利用转座子在染色体上能够移动的特性，分离出由于转座因子插入而造成该基因表型改变的突变株，构建突变株的基因组文库，以转座子作探针，从文库中钓出能与转座子探针杂交的阳性克隆。然后以该克隆中转座子的旁邻顺序为探针，从野生型植物的基因组文库中钓出杂交阳性的克隆，这就有可能得到所要克隆的基因。也有用农杆菌中的T－DNA作插入突变来克隆基因的，原理相同。 克隆植物中核基因的方法 ④现在已有许多植物如水稻、番茄与拟南芥等的限制片段长度多态性图谱〔RFLP）被建立，因此可利用这种图谱，通过共分离分析找出与所要克隆基因有紧密连锁关系的分子标记，然后利用染色体步行或染色体着陆(chromosome landing)策略，找到所要克隆的基因。 克隆植物中核基因的方法 ⑤如果有该基因的突变株或该基因受某种因素诱导表达，则可利用mRNA的差异显示法或减法克隆策略找到所要克隆的基因。 除以上几种方法外，也有人用其他生物中已被克隆的同源基因的顺序作探针或据此合成引物，从所研究的植物中克隆出同源的基因。在克隆到基因与cDNA后，即可对它们进行测序，并将基因的全顺序与相应的cDNA顺序作比较，就可以初步了解该基因结构的概况，如基因转录起始点的位置，内含子的数目、位置及其长度，终止密码子与加po1yA信号的位置等。通过基因的cDNA克隆在细菌细胞中的高表达，以纯化出它所编码的蛋白质，在测出该蛋白质氨基端的部分氨基酸顺序后，即可确定基因的翻译起始密码子，并推测出基因所编码蛋白质中的氨基酸顺序与蛋白质的相对分子质量Mr。 近年来，很多科学家对植物基因的结构进行了研究，结果表明它们与其他真核基因的结构很相似。下面将他们对植物基因中4个区域结构的研究结果简述如下： 1.1 5’上游区 这是指基因转录起始点5’端上游包括启动子在内的一段很长的区域，其中包含着与基因转录起始与表达调控有关的许多元件。这个区域在结构上有以下几点值得注意。 （1）转录起始位点 （2）TATA box、 CAAT box （3）顺式作用元件 （1）转录起始位点 Joshi曾比较了79个高等植物基因启动区的DNA顺序，推衍出在基因转录起始点附近的一致顺序(consensus sequence)是CTCATCA。当中的一个A是转录起始的核苷酸，一般都将此核苷酸编号为+1位。转录本中的核苷酸位置均以正数表示，而A的5’上游区非转录核苷酸则以负数表示，A的两边通常是嘧啶核苷酸。 （2）TATA box、 CAAT box Joshi的总结中还指出，在转录起始点上游－32±7 核苷酸对(bp)处有一段一致顺序TCACTATATAG，简称为TATA box，这些顺序对RNA聚合酶Ⅱ准确地使基因起始转录是必需的。在TATA box 上游-75bp 附近常有一致顺序GC(T／C)CAATCT，简称CAA