山东大学研究生国家精品教学指导PCR具体原理及实际应用.pptVIP

聚合酶链反应Polymerase chain reaction（PCR） ; 概 述;;一、发展简史;二、常规多聚酶链反应;由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①模板DNA的变性：dsDNA ssDNA ②模板DNA与引物的退火(复性)：引物与模板DNA的互补序列配对结合 ③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为原料，以靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链 新链又可成为下次循环的模板, 经2-3h可将待扩目的基因扩增放大几百万倍 ;5’; PCR反应的DNA扩增量呈指数上升, 最终的DNA 扩增量可用Y＝(1＋X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平均每次的扩增效率，n代表循环次数。 平均扩增效率的理论值为100%，则 Y＝2n 。 反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA 片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应” 。; 产物片段的长度严格地限定在两个引物链5‘端之间，即待扩增的特定片段。 以两条互补的DNA为模板，引物是从3‘端开始延伸， 其5’端是固定的，这种新生链作为模板时，由于5‘端序列固定，就等于再次延伸片段的3端被固定了止点，保证了新片段的起点和止点都限定