原核生物的DNA聚合酶.ppt

3’ 5’ 5’ 3’ 外切酶 聚合酶 N C 5’ 3’ 外切酶 小片段 大片段（ klenow片段） 切除RNA引物 损伤修复 校读功能 （常用的工具酶） (1) DNA聚合酶Ⅰ（DNA PolymeraseⅠ） 聚合功能 Kornberg酶（1956年） 100个酶分子/每个细胞 单链多肽（109kD） 大小二个片段 （枯草杆菌蛋白酶处理） 34kD 76kD 5’-3’聚合酶活性 模板 引物-3’-OH DNA聚合酶的校对功能 聚合酶 错配硷基 复制方向 正确 核苷酸 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 3′ 切除错配核苷酸 3’-5’ 外切酶活性 5→3外切酶活性 从5’-P端依次切除，可连续切除 只切配对的5’-P末端核苷酸 既可切除脱氧核苷酸也可切除核苷酸 (2)大肠杆菌DNA聚合酶Ⅱ(DNA polⅡ) MW为120KD 100个酶分子/每个细胞 聚合作用:只有DNA polⅠ的5% 3’→5’外切酶活性 无5’→3’外切酶活性。 对作用底物的选择性较强， 不是复制的主要聚合酶 (3)pol Ⅲ: 由十种共22个亚基组成 α亚基具有5’→3’聚合DNA的酶活性 ε亚基具有3’→5’外切酶的活性 θ亚基具有促进ε亚基外切酶的活性 大肠杆菌三种DNA聚合酶特性比较 DNA 聚合酶Ⅱ 分子量 每个细胞的分子统计数 5’-3 ’聚合酶作用 3’-5’核酸外切酶作用 5’-3’核酸外切酶作用 转化率 生理功能 DNA 聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅲ （复合物） 109，000 400 + + + 1 去除引物 填补缺口 修复损伤 校正错误 120，000 100 + + - 0 .05 未知 400，000 10-20 + + + 50 DNA复制 校正错误 比较项目 2. 真核细胞的DNA聚合酶 五种 DNA聚合酶α DNA聚合酶δ和PCNA DNA聚合酶γ DNA聚合酶β、ε 参与随从链的合成 参与前导链的合成 参与线粒体DNA的合成 参与DNA的修复 真核细胞几种主要DNA聚合酶的性质 DNA聚合酶 α β γ δ ε 蛋白质分子量（KD） 250 36-38 160-300 170 256 细胞定位 核 核 线粒体 核 核 5’ →3’聚合酶 有 有 有 有 有 3’ →5’外切酶 无 无 有 有 有 引物酶 有 无 无 无 无 DNA连接酶 五、DNA连接酶 DNA连接酶(DNA ligase)可催化两段DNA片段之间磷酸二 酯键的形成，而使两段DNA连接起来。 DNA连接酶催化的条件是： ① 需一段DNA片段具有3-OH，而另一段DNA片段具有5-Pi基； ② 未封闭的缺口位于双链DNA中，即其中有一条链是完整的； ③ 需要消耗能量，在原核生物中由NAD+供能，在真核生物中由 ATP供能。 六、解螺旋酶 (unwinding enzyme/ helicase/ rep蛋白） 解螺旋酶（unwinding enzyme），又称DNA解链酶(DNA helicase)或 rep蛋白，是用于解开DNA双链的酶蛋白。通过水解ATP获得能量，来打开DNA 双链，DNA双螺旋解开形成单链，暴露出碱基，便于复制，每解开一对碱基， 需消耗两分子ATP。 目前发现存在至少存在两种解螺旋酶。 七、单链DNA结合蛋白 单链DNA结合蛋白（single strand binding protein, SSB）又称螺旋反稳蛋白（HDP）。这是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。其作用为： ① 使解开双螺旋后的DNA单链能够稳定存在，即稳定单链DNA，便于以其为模板复制子代DNA； ② 保护单链DNA，避免核酸酶的降解。 八、拓扑异构酶(topoisomerase) 拓扑异构酶Ⅰ可使DNA双链中的一条链切断，松开双螺旋后再将DNA链连接起来，从而避免出现链的缠绕。 拓扑异构酶Ⅱ可切断DNA双链，使DNA的超螺旋松解后