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《环境毒理学概论》实验教案 孟庆俊，张明青 中国矿业大学环境与测绘学院 2008．3 实验一 鱼类回避试验 一 目的与要求 1．学习鱼类回避反应的生物学机理；了解回避装置的结构，设计原理及使用方法；掌握回避试验的操作步骤及试验结果的计算和分析。 2．实验前要求学生预习实验指导书的内容，对整个实验过程要熟悉，要有整体概念，充分理解实验原理。 二 实验的组织安排 1．由于学生人数较多，本实验共分两次进行，即每次一个班，每班分4组。 2．进入实验室后，先由教师对实验的原理等内容进行讲解，告之实验已准备的相关内容、学生要做的主要工作，以及实验中应请注意的有关事项。然后才能按部就班地进行实验。 三 实验原理 鱼类回避反应属于行为毒理学的研究范畴，它阐明水生动物对污染物是否回避，及其引起回避的浓度，以期对水体污染进行早期预报，并为制定和评价渔业水质标准提供重要依据。 本试验以鱼为试验动物进行回避试验。鱼类的嗅觉、味觉、视觉、和侧线等感受器对环境刺激具有保护性的本能反应，即回避反应。利用鱼类对受污染水产生回避反应的特点，认为世界污染水区和非污染水区的迷宫回避装置，给鱼以污染物刺激，鱼能主动躲避污染水区，迅速游向清洁水区，据此观察污染物对鱼的回避行为影响。 四 实验准备 （一）器材与试剂 按照实验指导书准备相关实验器材，主要是Y型回避装置，并配制相关化学试剂。 （二）实验生物 从市场提前一周购买实验用鱼，可以是当地可以见的任何一种鱼，但不应过大，体长在4cm左右即可，在实验室内驯养，以备实验所用。 五 步骤和方法 （一）预备试验 这部分内容由实验教师在学生的正式实验前来完成，主要的目的是确定实验浓度范围。具体的步骤如下： 按鱼类急性毒性试验方法，求出待测物的96hLC50值。本实验以资料中查得的96hLC50值为参考。鱼类对铜是非常敏感的，因此实验所选的受试化合物为硫酸铜。 选用不同的鱼种，以1/2和1/10 96hLC50 为试验浓度，进行探索性的回避试验，确定试验用敏感鱼种和试验浓度范围。 调节供水系统的流量 用2~4支20L的下口瓶构成可调的自供水系统。以活动夹调节水流速度，用液体流量计测量水流量，使水流量为200~400ml/min。 （三）回避试验步骤 试验槽全部注入清洁水，将试验鱼（1~10尾）移入槽中，让其在槽内适应15~30min。 关闭供排水系统，将试验鱼全部驱入混合区，配置所需浓度的待测物。 观察于记录 目测计数，观察污染物对鱼的回避行为的影响，打开供排水系统，移去隔板，每分钟（或每30s）监视和记录一次进入清洁区和污染区的鱼数。历时20~30min。重复四次，每次试验结束后，以清水洗净试验槽，间隔15min后，再行重复试验（即每一试验浓度重复四次，即两槽各注入待测液，二次清洁水）。然后更换待测物的浓度。 六 结果和报告 实验结果后一周内要把实验报告交至实验室，报告书中要重点写明实验的原始数据、实验数据的处理过程与结果，实验结论与讨论等内容，字迹清楚，条理分明。 七 注意事项 1．试验鱼需预先在实验室条件下驯养一周，且为健康鱼种。 2．必须保持实验室环境的安静，有恒定的温度和均一的光照条件。 3．严格控制槽中清洁水和试验待测溶液的流速。 4．试验应按由低浓度到高浓度的顺序进行。每个浓度试验结束后在更换浓度试验时，都必须用清水洗净回避装置。 5．当待测物浓度低时，须先配成母液备用。 6．如待测物易挥发，试验时应在回避装置上加盖，以免挥发，影响试验液浓度。 7．记录时，进入回避槽混合区的鱼，不予记录和计算。 实验二 污染区沉积物对水生动物的急性毒性试验 （鱼类急性毒性试验）0.0028-2.8mg/L 一 目的与要求 1．通过本实验，熟悉和掌握急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。 2．做好实验预习工作。 二 实验的组织安排 1．实验生物的准备及相关的预实验由实验室教师来完成。 2．学生实验分两次进行，一次一个班，每班分10个组。 3．进入实验后，先由教师简单讲解实验原理、过程与注意事项，并说明实验生物的准备与驯养过程。然后再开始正式的实验。 三 实验原理 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24小时，最好以96小时为一个实验周期，在24、48、72、96小时时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50%时的受试物的浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占有重要地位。 考虑到污染沉积物的取样难度，本实验采用金属铜作为受试物，测定其对鱼类的急性毒性。 四 实验准备 1．实验鱼的选择与驯养 试验用