方琪 遗传性肌肉疾病的诊断方法和策略.pptx

遗传性肌肉疾病的诊断方法和策略;肌病分类;肌肉疾病的重要诊断方法;MRI目前主要在炎性肌病 的诊断和病情评估中有很好的应用。如多发性肌炎（PM）MRI表现：T1为等或低信号，T2为高信号;肌活检适应症：肌肉疾病，脊髓前角或周围神经病，凡诉肢体无力、肌肉萎缩或肌肉疼痛者，都可送检;肌活检的适应症;肌活检的适应症;肌活检的适应症;肌肉活检部位的选择;肌肉活检部位的选择;肌肉活检部位的选择;取材后制片; 肌纤维类型的组织化学和酶组织化学区别 组织化学 Ⅰ型肌纤维 Ⅱa型肌纤维 Ⅱb型肌纤维 HE 深红 红 红 肌球蛋白ATP酶 预培育液pH 9.4 +（淡色） +++ （深色） +++ （深色） 预培育液pH 4.6 +++ + ++ （中间） NADH-TR +++ + + SDH +++ + ++ MGT +++ ++ ++ PAS + +++ ++ 油红O / 苏丹黑 + ± ± 肌磷酸化酶 + +++ +++ ;各种染色方法的作用;各种染色方法的作用;各种染色方法的作用;肌肉病的病理诊断中，除了酶组织化学染色，免疫组织化学染色 也起到非常重要的作用;比如大家熟知DMD表现为：Dystrophin蛋白缺失;肢带型肌营养不良2B型表现为：Dysferlin蛋白缺失;病理诊断在肌肉病诊断中意义重大，但有一定创伤性； 且病理诊断在某些情况下不能做出准确诊断： 1、病理表现类似的肌病，如表现为肢带型肌营养不良综合症的各种肌病； 2、遗传咨询或遗传干预，需要依靠准确的基因诊断； 3、部分症状前诊断。;近20年余来基因诊断技术与方法日新月异。 拿DMD来说，自从1987年KOENIG等人克隆了整个DMD基因14kb的cDNA开始，DMD基因检测取得了突破性进展;之后，基因检测技术不断进步。 如Southern blotting、PCR、多重PCR、荧光原位杂交（FISH）、限制性片段长度多态性连锁分析（RFLP） 、多重连接探针扩增技术（MLPA）、基因芯片等。;随着测序技术的进步，尤其是二代测序的出现，许多以往检测不到的点突变以及未知的新突变都能得到解决。 并且，二代测序较一代sanger测序而言，有费用更低、通量更高、速度更快的优点。;疾病;病例分析;例1;患者;杜氏肌营养不良(DMD);多重PCR结果：可见1号样本45、47、48、50、51外显子缺失，基因诊断明确;DMD/BMD;DMD不同检测方法比较;二代测序技术可以一次性检测DMD相关几乎所有突变;;例2;例2;基因检测发现CAPN3存在致病突变： 该基因2号外显子对应的编码区第25位碱基有CT的突变；20-25号外显子有缺失。通过多重连接探针扩增技术(MLPA)验证患者父母，确定突变不在同一染色体。 ;肢带型肌营养不良症2A型是一种常染色体隐性遗传病，由钙蛋白酶3（calpain-3）缺乏引起的，是肢带型肌营养不良症的常见类型。 发病年龄2-40岁，临床主要表现为肩甲带肌、骨盆带肌的无力和萎缩。;肢带型肌营养不良(LGMD2A);肢带型肌营养不良症基因相关研究近年进展迅速;LGMD2A;LGMD2A型;;例3;HE：多发性肌炎？其他？;例3;免疫病理学改变可作为炎性肌病与肢带型肌营养不良2B的鉴别 CD8/MHC-I复合体被认为多发性肌炎的炎性标志性免疫病理学改变 ;肢带型肌营养不良(LGMD2B);1、几乎所有的2B型，通过活检均能明确（取决于活检水平）。 2、DYSF基因巨大（55外显子），一代测序很难解决。 3、在一些远端损害为主的病人，DYSF的活检很多时候不典型。 4、临床明确的2B 型，在基