硅胶膜型质粒DNA小量提取试剂盒.docVIP

硅胶膜型?质粒DNA小量提取试剂盒 操作方法 将3~5ml菌液13,000rpm离心30秒收集沉淀（菌体）。 如果用1.5ml或2ml离心管则需反复离心2~3次。 倒掉上清，将沉淀（菌体）完全悬浮于100μl悬浮液（溶液 = 1 \* ROMAN I）中。 上清要尽可能去除干净，可用滤纸吸干。沉淀要用混旋器完全悬浮，否则将直接导致下一步的裂解不彻底，进而影响质粒DNA的产量和纯度。 加入150μl裂解液（溶液 = 2 \* ROMAN II），轻柔地颠倒混匀10次左右，溶液逐渐变得粘稠、清亮。 不可用混旋器剧烈振荡，否则会使质粒DNA断裂；裂解时间不宜超过5分钟，否则会造成染色体DNA的污染。 加入150μl中和液（溶液 = 3 \* ROMAN III），轻柔地颠倒混匀10次左右。 此时可见到白色絮状的染色体DNA及细菌碎片。 13,000rpm离心8~10分钟，将上清液小心转移入一个新的1.5ml离心管中，加入等体积（约400μl）的结合液，颠倒混匀。 将混和液吸入离心纯化柱中，静置至少3分钟，13,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。 此步使处于高盐状态下的质粒DNA与硅胶膜结合后，离心去除杂质。 将离心纯化柱重新套入废液收集管中，加入600μl 80%异丙醇（或80%乙醇），13,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。 如果离心纯化柱底部残留有异丙醇（或乙醇）