细菌鉴定之生化反应.ppt

细菌鉴定之生化反应 南医大三附院检验科 江培涛 常用试验 碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 各种酶类试验 抑菌试验 一 碳水化合物的代谢试验 1 糖（醇、苷）类发酵试验 原理：细菌含有发酵糖（醇、苷）的酶分解糖类产酸、产气、或仅产酸 培养基：含有0.5%~1%的糖（醇、苷）的液体、半固体、固体、或 微量生化管 方法： 纯菌种接种培养基，要求的温度，数小时至两周，微量管注意保持湿润，以免干燥 结果：能分解糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应 若能产气时，培养基可出现开裂气泡等现象 意义：肠杆菌科尤为重要 2 氧化-发酵试验（O/F） 原理：细菌分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；可以进行无氧降解的，称为发酵型；不分解葡萄糖的称为产碱型 培养基：HL二氏培养基 方法；待测菌同时接种两只HL培养基，其中一只滴加无菌的液体石蜡，高度不少于1cm，35℃培养48h或更长 结果：两只均无变化为产碱型；两只均产酸为发酵型；仅不加石蜡的产酸为氧化型 意义：肠杆菌科与非发酵菌的鉴别；葡萄球菌与微球菌的鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型 3 ONPG（β半乳糖苷酶试验） 原理：有的细菌可以产生β半乳糖苷酶，分解邻-硝基酚- β半乳糖苷生成黄色的邻-硝基酚 方法：从KIA上取菌，于0.25ML无菌生理盐水中制菌悬液，加甲苯一滴，使酶释放。37 ℃水浴5min,加0.25mlONPG试剂，水浴20min-3h观察结果 结果：呈现黄色为阳性，一般20-30min内显色 意义：迅速及迟缓发酵乳糖的细菌为阳性，不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定 注意：该试验不一定与分解乳糖相一致，决定于细菌产生的酶及其活性 七叶苷水解试验 原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，后者与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应生成黑色化合物，使培养基呈黑色 方法：将待测菌接种于七叶苷培养基，培养后观察结果 结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性 意义：D群链球菌与其他链球菌的区别，前者为阳性；肺炎克雷伯、阴沟肠杆菌多阳性 V-P试验 原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中被氧化为二乙酰，进而与培养基中蛋白胨内精氨酸中的胍基作用，生成红色化合物，即为V-P试验阳性。α奈酚可加速此反应 培养基：葡萄糖蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，35 ℃48h，加入甲液（6%α奈酚酒精溶液）和乙液（40 %KOH溶液） 结果：20min内出现红色为阳性，如无红色，且于35 ℃4h 后仍如故即为阴性 意义：本试验常与甲基红一起试验，前者阳性则后者多阴性 甲基红试验 原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者进一步生成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的PH降至4.5以下，加入甲基红试剂后显红色即阳性。若产酸量少，或进一步转化为其他物质，则培养基的PH仍在6.2以上，加入甲基红试剂后显黄色，为阴性 培养基：葡萄糖蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，2-4天后，加入甲基红试剂，观察结果 结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳性，黄色为阴性 意义：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸杆菌、等为阳性；肠杆菌属、哈夫尼亚菌属为阴性 7 葡萄糖酸盐试验 原理：某些细菌能氧化葡萄糖酸盐作为唯一碳源，生成2-酮基葡萄糖酸盐。加入班氏试剂，于沸水煮沸10分钟，出现砖红色沉淀，表明有葡萄糖酸盐的存在 培养基：2-酮基葡萄糖酸盐肉汤 方法：待测菌接种于培养基，35 ℃培养18-24h，于其中加入0.3ml浓缩班氏试剂，然后沸水中煮沸10分钟，出现砖红色沉淀表明有葡萄糖酸盐的存在 意义：用于肠杆菌科分类 二 蛋白质和氨基酸的代谢试验 1 明胶液化试验 原理：细菌产生明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体变为液体 方法：待测菌接种于明胶培养基，22 ℃培养7天。若用35 ℃孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察前先置4 ℃冰箱30min再观察 结果：培养基呈液化状态为阳性 意义：多数假单胞菌能液化明胶，肠杆菌科细菌如：沙雷菌、变形杆菌、 阴沟杆菌等可液化明胶 2 吲哚（叮基质）试验 原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚，当加入吲哚试剂-柯氏试剂（对二氨基苯甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚 培养基：蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，35 ℃培养24-48小时，沿试管壁缓慢加入吲哚试剂 结果：于两者接触面出现红色为阳性，无色为阴性 意义：肠杆菌科细菌的鉴定；大肠杆菌、产酸克雷伯为阳性 试剂：柯氏试剂（对二氨基苯甲醛）与欧氏试剂的区别：前者含戊醇，后者含酒精，都含浓盐酸，前者主要成分为后者