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骨髓细胞染色体制备与观察 实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考 骨髓细胞染色体制备与观察 实验目的：掌握制备方法，计算分裂中期染色体数目，观察端着丝点的形态特点． 实验原理：小鼠骨髓细胞中的造血干细胞，具有高度的分裂能力，可得到较多的细胞中期的分裂相． 骨髓细胞染色体制备与观察 实验用品： 材料：小白鼠（2n=42）． 用品：显微镜、冰箱、恒温箱、恒温水浴锅、离心机、注射器、解剖剪、 镊子、移液器、载玻片、烧杯等。 药品：0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)柠檬酸钠溶液、0.07M氯化钾溶液、 （或0.35%氯化钾溶液）、蒸馏水、Giemsa原液，甲醇、乙酸等。 骨髓细胞染色体制备与观察 实验步骤： 预处理 取股骨 冲洗骨髓 离心 低渗 固定 离心 滴片 染色 观察 骨髓细胞染色体制备与观察 1、取健康小白鼠（约65-90天龄），腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为4ml/Kg动物体重。 2、2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，取出股骨，把肌肉刮净，剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净血污及残渣。 3、剪去关节头，用3-5ml2%柠檬酸钠溶液冲洗股骨断面至粉白色，制备了骨髓细胞悬浮液。 骨髓细胞染色体制备与观察 4、将骨髓细胞悬液，1000rpm离心10分钟。 5、吸去上清液，加入0.075M氯化钾溶液5ml，立即将细胞团吹打均匀，置37℃水浴25-30分钟。 6、加入卡诺氏固定液5-6滴，搅拌均匀进行预固定10分。 7、再以1000rpm离心10分钟 。 骨髓细胞染色体制备与观察 8、弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹均匀制成细胞悬浮液涂片观察。 注意：如果细胞分散的不好，可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散。 9、取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自然干燥。 骨髓细胞染色体制备与观察 10、用Giemsa染液,染色15-20分钟，自来水冲洗，空气干燥。 11、在低倍镜下观察中期分裂相细胞，计算染色体的数目，以确定其细胞2n的染色体数目。 骨髓细胞染色体制备与观察 绘图：绘制一个图像清晰、形态典型的小白鼠染色体组形图。 思考：思考实验中应注意的事项，积累经验。 骨髓细胞染色体制备与观察 骨髓细胞染色体制备与观察 * * *
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