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专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、研究思路: (一)筛选菌株 1.筛选原理:((实验室中) 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养.温度.pH),同时抑制或阻止其他微生物生长. 自然界中的例子:Taq细菌的筛选(高温条件) 2.分析本课题所用的培养基配方(P22) (1)基本成分: 水 无机盐:KH2PO4\Na2HPO4\MgSO4·7H2O 碳源:葡萄糖 氮源:尿素 (2)培养基特点:氮源只有尿素一种,只有能合成脲酶的微生物才可利用 (3)培养基对微生物的选择: 培养基中尿素是唯一的氮源,只有能分解尿素(合成脲酶)的微生物才能正常生长繁殖,而其他微生物由于缺乏氮源将会无法生存. 3.选择培养基: 在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称做选择培养基. (二)统计菌落数目:(活菌计数法) 1.统计原理: 当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.通过统计菌落数,就能推测样品中大约含有多少活菌. 例:某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234,那么每克样品中菌落数是(涂布时所用稀释液的体积为0.1mL) 公式:每克样品中的菌落数=(C÷V) ×M (二)统计菌落数目:(活菌计数法) 2.注意事项: (1)统计结果一般用菌落数而不是活菌数表示.(为什么?) (2)实验时,至少要涂布3个平板作为重复组,才能增强实验准确性与说服力; (3)重复组的结果要基本一致. 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 * 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的培养皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 * （三）设置对照 1、设置对照的目的： 排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 对照实验是指除了 被测试 的条件外，其他条件都 相同 的实验。满足该条件的称为 对照组，未满足该条件的称为 实验 组。 * ㈢.设置对照： 　课本23页例子中A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种，怎么办？ 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染（混入其他N源）或操作失误。 * 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 * 怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离 尿素 细菌 判断该 培养基 有无选 择性 实验 组 对照 组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长可分解尿素的细菌 生长多种微生物 是 * 二.实验设计 (一)土壤取样: (如何取?取哪种?) (二)制备培养基 (培养基种类.数量,仪器种类.数量) (三)微生物的培养与观察 (操作过程,培养条件,观察对象等) (四)细菌的计数 (选择对象,计数方法) 三.实验的具体操作 ㈠.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3厘米左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 * [二]制备培养基 由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。 将稀释相同倍数的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 准备牛肉膏蛋白胨培养基和以尿素为唯一氮源的选择培养基。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉