野杏SSR-PCR反应体系优化-经济林研究-中南林业科技大学.pdf

第37 卷 第1 期 经济林研究 Vol. 37 No.1 2019 年3 月 Non-wood Forest Research Mar. 2019 Doi:10.14067/ki.1003-8981.2019.01.004 http: // 野杏SSR-PCR反应体系优化 董胜君，夏泽臻，卢彩云，刘明国，吴月亮，陈建华 （沈阳农业大学 林学院，辽宁 沈阳 110866 ） 摘 要：为建立稳定可靠的野杏 SSR-PCR 反应体系，以 3 个野杏无性系 170 号、240 号、263 号和 1 个西伯利 亚杏无性系 508 号为试验材料，采用 L 5 16(4 ) 正交试验设计对影响野杏 SSR-PCR 反应的 5 个因素在 4 个水平上进 行优化。结果表明：各因素对反应体系的影响由大到小依次为 DNA 模板浓度、引物、dNTP、Mg2+ 、Taq 聚合 酶。野杏 SSR-PCR 最佳反应体系（总体积 20 μL ）：dNTPs 0.45 mmol/L、Mg2+ 2 mmol/L 、Taq 酶 1.125 U、引物 0.125 μmol/L 、DNA 模板 20 ng 。选用引物X128 和 60 个野杏样木对该体系进行稳定性验证，扩增产物集中在 100 ～ 200 bp ，稳定度高，多态性良好，该体系可应用于野杏分子标记辅助育种等方面的研究中。 关键词：野杏；SSR-PCR；反应体系；优化 中图分类号：S662.2 文献标志码：A 文章编号：1003—8981(2019)01—0025—07 Optimization of SSR-PCR reaction system for Armeniaca vulgaris Lam. var. ansu DONG Shengjun, XIA Zezhen, LU Caiyun, LIU Mingguo, WU Yueliang, CHEN Jianhua (College of Forestry, Shenyang Agricultural Uinversity, Shengyang 110866, Liaoning, China) Abstract: In order to establish a stable and reliable Armeniaca vulgaris var. ansu SSR-PCR reaction system, three A. vulgaris Lam. var. ansu clones No.170, No.240, No.263 and one A. sibiricat clone No.508 were used as experiment 5 materials, and five factors affecting SSR-PCR reaction were optimized at four levels using the orthogonal design L16(4 ). The results showed that order of the factors was DNA template concentration, primer dosage, dNT