利用冷冻保藏菌种测定食品中的水溶性维生素-食品与发酵工业.pdfVIP

ki．11—1802／ts．201601011 DOI：10．13995“．cn 利用冷冻保藏菌种测定食品中的水溶性维生素 李全霞1，崔亚娟1’¨，陈兆天1，张绩觅1，徐佳佳1，刘玉峰1 l(北京市营养源研究所分析检测中心，北京，100069)2(中国农业大学农学与生物技术学院，北京，100193) 摘 要 建立了一种简单的甘油保护的冷冻保藏菌种的制备方法，通过测定冷冻菌种的活菌数和标准曲线，研 7 究冷冻菌种的稳定性和重复性。结果显示，一20℃下保藏8个月时，冷冻菌种保藏液中的活菌数仍达到10 CFu／mL以上，利用冷冻菌种测定烟酸、泛酸、叶酸和生物素的标准曲线与传统方法的标准曲线高度一致，利用 冷冻保藏的菌种和新鲜菌种同时进行6种样品的分析，结果没有显著差异。冷冻菌种表现稳定，使用方便，快 捷，适合作为菌种来源。 关键词 微生物法；烟酸；泛酸；叶酸；生物素 维生素是生物体内具有生理活性的物质，是一种 进行测定过程中，保持营养缺陷型菌株的代谢活性对 食物或者膳食营养价值的真实反映。食物中某些维生 维生素的定量至关重要。传统的连续传代保存方法容 素的生物活性可以作为食物营养价值评价标准的一部 易引入基因突变或者杂菌，培养基的理化性质及微生 分。测定生物活性的最直接手段就是利用基于生理功 物代谢产物等原因还会导致微生物性状发生改变‘“。 能的生物分析方法。这也是维生素被发现的原因，至 因此应该与其他能够长期保存菌株的方法相结合防止 今我们也还在利用此方法去估量其他具有潜在治疗益 处的维生素类似物…。随着仪器分析方法的迅猛发 展，一些新的测定维生素的方法不断涌现，如高效液 Home对冷冻菌种的制备方法进行了改良，将其用于大 相一柱后衍生荧光法、液相色谱一质谱联用、超高效液相 鼠组织部分中叶酸的测定分析∽1。2005年，美国分析 ofOfficial 色谱一串联质谱法等¨。。。微生物分析维生素方法因 化学家协会(AssociationAnalYticalchemists． 为其高的灵敏度和可靠性，测定结果可涵盖食物中添 加和天然两种类型，从1940年代一直沿用至今。 由于微生物对维生素的特异活性，微生物法很长 时间被喻为“黄金标准”方法，所有的B族维生素都 能够利用微生物法进行测定¨J。所使用的分析菌种 定墨西哥仙人掌颈中的叶酸¨“。2011年，徐文婕等将 都来自于美国典型培养物培养中心(American Type甘油冷冻保存乳酸杆菌与96孔酶标相结合检测血浆 Culture collection，ATcC)。目前，国标方法中除了维 生素B。使用酵母菌检测外，其他测定方法所使用的 法，结合实验室现有的条件，建立了制备测定烟酸、泛 菌种都属于乳酸杆菌。 酸、叶酸和生物素的冷冻保藏菌种方法，并应用于日常 水溶性维生素一般是作为辅酶或辅基参与到机 的检测分析中。经过8个多月的对比分析，该冷冻菌 体的基础代谢反应中，是生物体生长必需的营养素。 种表现稳定，使用方便，快捷。 自然界中某些细菌或真菌也需要维生素维持生长，但 1 材料与方法 本身并不能合成维生素，属于营养缺陷型的菌株，采用 微生物分析维生素的原理就来源于此。在使用微生物 1．1材料与试剂 第一作者：硕士、助理研究员(崔亚娟副研究员为通讯作者 8014，鼠李糖乳杆菌(缸幻6伽谢w^钇，加佛w)ATCC7469。 E．mail：cuiyj66@163．com)。 基金项目：北京市科技计划项目(z141100002614叭3)