动物细胞培养和核移植技术上课.ppt

克隆动物的研究意义 1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 2.加速改良动物品种 3.治疗人类疾病，提供供体（器官、细胞、组织） 4.保护濒危动物 体细胞核移植技术存在的问题 1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。 2.成功率非常低 3.克隆动物食品的安全性问题。 2.体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 课后习题 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 这些技术的理论基础是什么？ 植物组织培养 和植物体细胞杂交 植物细胞的全能性 动物细胞全能性如何？ 动物细胞工程 通常采用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 动物细胞核移植 是其他动物细胞工程技术的基础。 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？ 从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 原理是细胞增殖 （有丝分裂） 。 聚焦一、动物细胞培养过程 简述动物细胞培养的操作过程 分离组织（低幼动物） 分散细胞（胰蛋白酶） 原代培养（细胞增殖） 传代培养（细胞增殖） 分装 聚焦一、动物细胞培养过程 动物细胞生长特点： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 细胞贴壁过程 那么什么是接触抑制？ 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 动物细胞生长特性 部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。 1、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖，也不利于细胞营养物质的吸收和代谢废物的排出。 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理。 思考题 3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质 不能，因为两者的最适pH不同， 4、幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？思考一下，这是什么道理？ 一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养 思考题 5、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？ 7、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？ 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。 将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。 这样的过程叫做传代培养 思考题 8、如何理解原代培养和传代培养？ 9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 10、有些为何能一直传下去？ 11、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？ 上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 不都能 发生突变，朝着癌细胞方向发展 不全是 思考题 12、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 保存10代以内的细胞，因为10－50部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展 思考题 13、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 胰蛋白酶 剪碎 细胞株 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质已改变 　　细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别：