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克隆动物的研究意义 1.克隆动物作为生物反应器,生产医用蛋白 2.加速改良动物品种 3.治疗人类疾病,提供供体(器官、细胞、组织) 4.保护濒危动物 体细胞核移植技术存在的问题 1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷,如体型过大,异常肥胖,发育困难,免疫失调等。 2.成功率非常低 3.克隆动物食品的安全性问题。 2.体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗?为什么? 课后习题 植物细胞工程常用的技术手段有哪些? 这些技术的理论基础是什么? 植物组织培养 和植物体细胞杂交 植物细胞的全能性 动物细胞全能性如何? 动物细胞工程 通常采用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 动物细胞核移植 是其他动物细胞工程技术的基础。 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 1、动物细胞培养的概念是什么?该技术实施的原理是什么? 从动物机体中取出相关组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。 原理是细胞增殖 (有丝分裂) 。 聚焦一、动物细胞培养过程 简述动物细胞培养的操作过程 分离组织(低幼动物) 分散细胞(胰蛋白酶) 原代培养(细胞增殖) 传代培养(细胞增殖) 分装 聚焦一、动物细胞培养过程 动物细胞生长特点: 细胞贴壁: 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。 要求: 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制: 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。 细胞贴壁过程 那么什么是接触抑制? 接触抑制:细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止,数量不再增加。 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 动物细胞生长特性 部分细胞突变,获得不死性,向癌细胞方向发展,糖蛋白减少。 1、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢? 2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢? 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖,也不利于细胞营养物质的吸收和代谢废物的排出。 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理。 思考题 3、胰蛋白酶的作用是什么呢?由此可说明细胞间的物质是什么成份?能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?为什么? 胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质 不能,因为两者的最适pH不同, 4、幼龄与老龄动物的组织细胞比较,分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较,哪一种更易于培养?思考一下,这是什么道理? 一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样,组织细胞的分化程度越低,则增殖能力越强,所以更容易培养 思考题 5、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒? 6、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖? 7、如此时细胞数量并未达到人们的需求,应该怎样办? 易于培养细胞贴壁,进行生长增殖 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞分裂就会停止分裂增殖,这种现象叫接触抑制。 将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理,然后继续增殖。 这样的过程叫做传代培养 思考题 8、如何理解原代培养和传代培养? 9、传代培养的细胞能一直传代下去吗? 10、有些为何能一直传下去? 11、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗? 上述过程中,在第一培养瓶中培养就是原代培养,之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 不都能 发生突变,朝着癌细胞方向发展 不全是 思考题 12、人类一般保存的是哪类细胞呢?为什么? 保存10代以内的细胞,因为10-50部分细胞的细胞核型可能发生变化,有少部分还发生突变向癌细胞方向发展 思考题 13、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体? 不能,动物细胞培养只能使细胞数目增多,不能发育成新的动物个体 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 胰蛋白酶 剪碎 细胞株 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质已改变 细胞株:原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到40~50代,这种传代细胞为细胞株。 细胞系:细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别:
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