GeneGun基因枪之优缺点优点.ppt

環境奈米技術 授課教師：張章堂 Virus choice Properties of T7 Morphology Virions tailed; head. Short tail with 6 short fibers. Nucleocapsids isometric; 60 nm in diameter. Nucleic Acid Virions contain one molecule of linear double stranded DNA. Properties of MS2 Morphology Virions quasi-isometric elongated; not enveloped. Nucleocapsids 24-26 nm in diameter. Genome. Linear; single stranded; RNA. Surrogate for the human virus(Rubella、Influenza、Measles、Mumps) Which kinds of Virus ? Gene Gun 基因槍之優缺點 優點： 基因傳輸效率高 操作簡單 直接將基因打入細胞，利用細胞質傳遞至細胞核，對人體危害性最低無，副作用 缺點： 細胞膜被破壞 細胞表面濕度影響射入速度 成功率取決經驗 Application of Gene Gun 奈米微粒毒性探討 (1)奈米微粒毒性探討目的 (2)材料與方法 (3)效應指標 (4)Nose-only exposure chamber (1)奈米微粒毒性探討目的 以細胞實驗探討不同粒徑、不同數目濃度之超細微粒造成的毒理效應。 利用疾病動物模式探討不同粒徑、不同數目濃度之超細微粒造成的毒理效應。 發展適合超細微粒健康風險評估之疾病動物模式及暴露系統。 (2)材料與方法 Polystyrene microspheres, Polysciences, Park Scientific, Northamton, U.K.) 64nm, 109, 202nm 1 mg contain 6.95 x 1012, 4.55 x 1011, 2.21 x 1011 particles, respectively. B. 細胞實驗 A549細胞，人類第二型肺泡上皮細胞 株(CCRC 60074, 新竹食品工業發展研究所) BEAS-2B細胞，正常人類支氣管上皮細胞株 (CRL-9609, ATCC) C.實驗設計 D. 病變測試 微粒暴露後，A549細胞IL-8增加。 低濃度之劑量反應較高濃度明顯。 A549細胞IL-6無顯著增加。 E.動物實驗 3月大雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠，以Monocrotaline (60mg/kg)誘發肺高血壓。 以氣管灌注(intratracheal instillation)給予奈米微粒 對照組(n=4)，saline，0.5ml 低濃度組(n=4) ，50nm polystyrene, 100ug/ml，0.5ml 高濃度組(n=1)，50nm polystyrene, 1 mg/ml，0.5ml 暴露後24小時將大鼠犧牲，收集肺灌洗液、組織及周邊血液。 (3)效應指標 呼吸道發炎指標 (Markers of inflammation and lung injury) 肺泡灌洗液 (Bronchoaleolar lavage fluid) 總細胞數 (Total cell count) 白血球分類 (WBC differential) 乳酸脫氫酵素 (Lactate dehydrogenase activity) 總蛋白質 (Total protein) 氧化壓力指標 (Markers of oxidative stress) Glutathione in lung tissue 8-OHdG in peripheral blood Markers of proinflammtory mediators Cytokine IL-6 Cytokine IL-8 TNF-α A.呼吸道發炎指標 B.氧化壓力指標 (4)Nose-only exposure chamber A.生理循環監測系統 B. 呼吸生理監測系統 * 中華民國九十九年三月 Principles and Procedures to Assess Nanomaterial Toxicity Outlines Introduction Paradigms for Assessing NM Toxicity Oxidative stress for ultrafine partilce Oxidative