牛乳中A2型酪蛋白A2奶检测技术规程.docVIP

ICS? FORMTEXT 65.020.01 FORMTEXT B 40 FORMTEXT ????? DB FORMTEXT 37 FORMTEXT 山东省地方标准 DB FORMTEXT 37/T FORMTEXT 3572—2019 FORMTEXT ????? FORMTEXT 牛乳中A2型β-酪蛋白（A2奶）检测技术规程 FORMTEXT Code of practice for detection of A2 type of β-casein (A2 milk) in cows milk 2019 - 05 - 29发布 2019 - 06 - 29实施 FORMTEXT 山东省市场监督管理局???发布 DB37/T 3572—2019 PAGE 1 目??次 TOC \h \z \t前言、引言标题,1,参考文献、索引标题,1,章标题,1,参考文献,1,附录标识,1,一级条标题, 3 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 检测原理 1 5 主要试剂配制 2 6 主要仪器设备 2 7 质谱检测及数据处理参数 2 8 检测方法 2 8.1 样本采集 2 8.2 蛋白提取 2 8.3 蛋白质的消化 2 8.4 质谱鉴定 3 9 结果判定 3 9.1 SDS鉴定 3 9.2 A2型β-酪蛋白的判定 3 10 废弃物的处理 3 11 检测过程中防止交叉污染的措施 3 附　录　A （资料性附录） 主要试剂配制 4 附　录　B （资料性附录） 主要仪器设备 6 附　录　C （资料性附录） 蛋白检测参数及结果 8 前??言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省农业科学院奶牛研究中心、山东奥克斯畜牧种业有限公司、山东省畜牧总站、大同市南郊区四方高科农牧有限公司、中国农业大学、江苏省农业学院畜牧研究所。 本标准主要起草人：黄金明、王秀革、鞠志花、姜强、王玲玲、张思聪、张亚冉、魏晓超、高亚平、刘文浩、高运东、侯明海、杨国瑞、戴蕴平、仲跻峰。 牛乳中A2型β-酪蛋白（A2奶）检测技术规程 范围 本标准规定了牛奶和奶粉中A2型β-酪蛋白（A2奶）的检测方法。 本标准适用于牛奶和奶粉中A2型β-酪蛋白（A2奶）的检测。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 19495.2—2004　转基因产品检测　实验室技术要求 GB/Z 35959—2018　液相色谱-质谱联用分析方法通则 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 A2型β-酪蛋白　A2 β-casein；A2 CSN2 β-酪蛋白由224个氨基酸（含有15个氨基酸的信号肽）组成，具有不同的变体型（A1、A2、A3、B、C、E、F、H1、I），当第51位、52位、82位、103位、108位、121位、137位、167位氨基酸分别为谷氨酸、谷氨酸、脯氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、丝氨酸、脯氨酸时，称为A2型β酪蛋白。 A2奶 A2 milk 所含β酪蛋白为A2型的牛奶称为A2奶。 质谱法　Mass spectrometry；MS 试样被电离后，形成不同质荷比的离子，根据这些离子的质量数和相对丰度分析试样的方法。 质荷比　Mass-to-charge ratio 离子的质量m与其所带的电荷数z之比，以m/z表示。 检测原理 β-酪蛋白变体型对应不同的氨基酸突变位点（p.51 E＞K、p.52 E＞K、p.82 P＞H、p.103 L＞I、p.108 M＞L、p.121 H＞Q、p.137 S＞R、p.167 P＞L）（参考序列：GenBank AAA30431.1），而不同氨基酸之间存在分子量差异。利用质谱分析技术，根据质荷比差异将样品蛋白质中存在氨基酸突变的肽段鉴定出来，从而确定氨基酸突变位点，实现对不同变体型β-酪蛋白检测的目的。 主要试剂配制 实验所用水为符合GB/T 6682规定的双蒸水；高压灭菌条件为121 ℃，1.034×105 Pa压力，蒸汽灭菌20 min。试剂配制见附录A。 主要仪器设备 见附录B。 质谱检测及数据处理参数 见附录C。 检测方法 样本采集 待检测的新鲜牛奶 每头奶牛采集新鲜牛奶（排除头奶或末乳）50 mL，充分混匀后，-80 ℃保存。 待检测的