练习++血红蛋白的提取和分离.ppt

课题3 血红蛋白的提取和分离 用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 ( D ) A．路程较长，移动速度较慢 B．路程较长，移动速度较快 C．路程较短，移动速度较慢 D．路程较短，移动速度较快 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个B 选用红细胞作分离蛋白质的实验材料，下列是其优点的是 ( ABC )多 A．血红蛋白是有色蛋白 　　 B．红细胞无细胞核 C．红细胞蛋白质含量高 　　 D．红细胞DNA含量高 1、样品处理 （1）、红细胞的洗涤： （2）、血红蛋白的释放： （3）、分离血红蛋白溶液： 分离血红蛋白溶液 （1）血红蛋白提取和分离的程度可分为四步：______、______、______和______。 （2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。 ①加入柠檬酸钠的目的是__________。 ②以上所述的过程即是样品处理，它包括______、______、收集血红蛋白溶液。 （3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。 ①透析的目的是__________________。 ②透析的原理是__________________。 （4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。 ①样品纯化的目的是______________________________。 ②血红蛋白有什么特点？__________。 这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？ 下列操作正确的是（ D ） A. 分离红细胞时采用低速长时间离心 B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可 C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D. 透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h 下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中，正确的是 ( )多 A．采集血样后要高速短时问离心获得血细胞 B．洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净。 C．在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白 D．释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来 在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是 D A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐 B洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果 C洗涤过程选用0.1%的生理盐水 D透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质 凝胶色谱柱取长为40 cm，内径为1．6 cm，有关说法中，正确的是 ( ABD )多 A．一般凝胶色谱柱直径的大小不影响分离的效果 B．凝胶色谱柱过高超过1 m，不影响分离的效果 C．凝胶色谱柱过矮，则影响混合物的分离度 D．凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大 在装填凝胶柱时，不能有气泡存在的原因是A A、气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次 序，降低分离效果 B、气泡阻碍蛋白质的运动 C、气泡与蛋白质发生化学反应 D、气泡在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密 样品的加入和洗脱的操作不正确的是　A　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A． 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B．加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C．等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D．用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（ A） A．可采集猪血作为实验材料 B．用蒸馏水重复洗涤红细胞 C．血红蛋白释放后应低速短时间离心 D．洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液 二、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步： （1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白释放；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。 （2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。 （3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。 （4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述正确的是（ ACD ）多 A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D. 可通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 （3）样品加入与洗脱 注意：正确的加样操作是：1、不要触及并破坏凝胶面。2、贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。 A A ACD * * 思考1 分离