克隆基因的表达3.ppt

载体表达出的外源基因蛋白质不与细菌的任何蛋白质融合在一起。 S-D序列 ATG-外源基因-TAG 优点： 5、几种类型的原核表达载体 1）. 非融合型表达载体 产物结构接近于真核细胞体内的蛋白质结构。 缺点： 容易被宿主菌的蛋白酶所破坏。 载体表达出的外源蛋白质与细菌的分泌信号肽连在一起，可被宿主菌分泌到细胞周质中。 如：pIN III系列： 2）. 分泌型表达载体 pIN III-comA1, pIN III-comA2, pIN III-comA3, 分泌信号肽外膜蛋白基因 Ipp lac P lac O S-D/ATG ompa 插入位点 表达出的外源基因产物蛋白是与质粒载体上的菌体蛋白连接在一起的。 3）. 融合蛋白表达载体：如pGEX系列 ?优点： 便于融合蛋白的分离和纯化。 lacI tac lac O S-D/ATG GST 插入位点 TGA lacP GST：谷胱甘肽巯基转移酶 柱（column） GST 外源蛋白 凝血酶 外源蛋白 柱（column） GST GST 洗脱 柱（column） 可再利用 GST融合蛋白用Glutathione Sepharose亲和层析柱分离纯化。 分离和纯化： 其它融合蛋白系统： His-tag（组氨酸标签）： 在外源多肽的N端或C端接上6个组氨酸（His）。 His-t