一土壤脲酶活性测定一.PPT

环境化学实验讲义 南开大学环境科学与工程学院 实验一 土壤脲酶活性测定 一、实验目的 掌握土壤脲酶活性测定第一种方法，了解所取土壤的脲酶活性。 了解尿素这一有机物在土壤环境中的降解转化。 二、简单原理 酶是一类具有蛋白质性质的、高分子的生物催化剂。土壤酶是活的有机体所合成的，或者在其生长过程中分泌与体外，或者在其死亡后自溶而释放出。所有的酶均能显示其活性。 显著的酶的特征之一是其催化反应的专一性。例如，脲酶对尿素的催化降解就及其专一。 土壤中的酶的来源有二种。一是来自于高等植物根系分泌及土壤中动植物残体分解。二是来源于土壤微生物的生命活动。 土壤酶可分为胞内酶和胞外酶两种。胞外酶或溶出后的胞内酶进入土壤结构后，均具有相对稳定性，如能抗微生物分解和抗热稳定性等。它们以三种形式存在于土壤中，一是以吸附状态贮积于土壤中。二是于土壤腐殖质复合存在。三是以游离状态存在。 对于脲酶，它能促使尿素水解转化成氨、二氧化碳，反应如下 : 在土壤中，在pH值为6.5~7.0是脲酶活性最大，通过测定释放出的NH3量，可以确定脲酶的活性。土壤中脲酶活性一般以37℃培养48小时每克土壤释放出的NH3–N毫克数表示。 三、步骤概要 1、取二个250ml锥形瓶，各加入10.0克土壤，再各加入10ml混合磷酸盐缓冲溶液（pH6.8）。摇动处理15分钟，使均匀。在往第一瓶内加入10ml浓度10%的尿素溶液，再经屏内容物充分混匀，作为试样。第二瓶内加入10ml蒸馏水，作为对照。将两个瓶置于37℃培养箱中培养48小时（要塞上纱布塞子）。 2、培养结束后，往两个瓶内各加入50ml 2N KCL 溶液。塞紧后再振荡30分钟。到时立即将试样过滤（滤纸可以用蒸馏水润湿）到蒸氨瓶内。 3、在过滤的间隙时间取两个50ml比色管，各加入10,00ml 4%硼酸溶液。现将50ml比色管在冷凝管下，使冷凝管出口尖端插入硼酸溶液中，准备蒸馏。 4、过滤完毕后，迅速往蒸氨瓶内注入20ml 4N 的NaOH溶液，立即塞上塞子。接通冷凝水，加热蒸馏。 5、当馏出液达到50ml左右，停止蒸馏。取下比色管，将管内接收液定量转入到50ml锥形瓶中加4-5滴指示剂（甲基红-亚甲基蓝混合液），用0.1N HCL滴定瓶内的氨，滴定到淡紫色为终点。记录试样和对照消耗的HCL体积V和V0（ml）。 四、计算 式中，W为称取的样品重（g），N为HCL当量浓度。 五、问题讨论 1、除了测定尿素降解产物氨外，还能有什么方法可以测定脲酶的活性？ 2、实验中为什么要加入甲苯？ 3、步骤4中为什么要迅速加入NaOH？ 4、如果蒸氨时吸收液倒吸到冷凝管中如何解决？ 实验二 土壤的阳离子交换量 一、概述 土壤是环境中污染物迁移转化的重要场所，土壤的吸附和离子交换能力又使它成为重金属类污染物的主要归宿。污染物在土壤表面的吸附剂离子交换能力又和土壤的组成、结构等有关，因此，对土壤性能的测定，有助于了解土壤对污染物质的净化能力及对污染负荷的允许程度。 土壤中主要存在三种基本成份，一是无机物，而是有机物，三是微生物。在无机物中，粘土矿是其主要部分。粘土矿物的晶格结构中存在许多层状的硅铝酸盐，其结构单元是硅氧四面体和铝氧八面体。四面体硅氧层中的Si4+常被Al3+离子部分取代；八面体铝氧层中的Al3+可部分的被Fe2+、Mg2+等离子取代，取代的结果便在晶格中产生负电荷。这些电荷分布在硅酸盐的层面上，并以静电引力吸附层间存在的阳离子，以保持电中性。这些阳离子主要是Ca2+、Mg2+、Al3+、Na+、K+和H+等，它们往往被吸附于矿物质胶体表面上，决定着粘土矿物的阳离子交换行为。 土壤中的有机物质主要是腐殖物质，它们可分为三类。一类是不能被碱萃取的胡敏素，另一类是可被碱萃取，但当萃取液酸化时析出而成为沉淀物的腐殖酸，第三类是酸化时不沉淀的富里酸。这些物质成份复杂，分子量不固定，结构单元上存在各种活性基因。它们在土壤中可以提供出很大量的阳离子交换能力，而且对重金属污染物在土壤中有吸附、络合等行为起着重要作用。 土壤存在的这些阳离子可被某些中性盐水溶液中的阳离子交换。若无副反应时，交换反应可以等当量地进行。 若用过量的强电解质，如硫酸溶液，把交换到土壤中去的钡离子交换下来，这是由于生成了硫酸钡沉淀，且由于氢离子的交换吸附能力很强，交换基本完全。这样，通过测定交换反应前后硫酸含量变化，可算出消耗的酸量，进而算出阳离子交换量。这种交换量是土壤的阳离子交换总量，通常用每克100克干土中的毫克当量数表示。 二、目的要求 1、测定污灌区表层和深层土的阳离子交换总量。 2、了解污灌对阳离子交换量的影响。 三、仪器与试剂 电动离心机 离心管