斑节对虾含硒谷胱甘肽过氧化物酶基因全长克隆及表达分析.pdf

第40 卷 第 11 期 水 产 学 报 Vol. 40, No. 11 2016 年 11 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Nov., 2016 文章编号: 1000–0615(2016)11–1664–10 DOI: 10.11964/jfc.20150810046 斑节对虾含硒谷胱甘肽过氧化物酶基因全长克隆及表达分析 1,2 1,3 1,3 1 2 1* 唐 蕾 ， 傅明骏 ， 赵 超 ， 邱丽华 ， 刘文生 ， 江世贵 (1. 中国水产科学研究院南海水产研究所，农业部南海渔业资源开发利用重点实验室，广东 广州 510300; 2. 华南农业大学动物科学学院，广东 广州 510642; 3. 中国水产科学研究院南海水产研究所，热带水产研究开发中心，海南 三亚 572018) 摘要：为了研究含硒谷胱甘肽过氧化物酶(selenium-dependent glutathione peroxidase, Se- GPx)在斑节对虾应激反应和卵巢发育中的作用，实验以斑节对虾肝胰腺转录组数据中筛 选获得的Se-GPx 基因(Pm Se-GPx ) 片段为基础，利用RACE 技术获得Pm Se-GPx 基因的 cDNA全长，并对其进行了生物信息学分析；利用荧光定量PCR技术研究了Pm Se-GPx 在 斑节对虾不同组织、卵巢发育各期、肝胰腺组织在pH9 、硫酸铜(Cu2+)应激下的相对表达 量和变化趋势。结果显示，Pm Se-GPx 基因cDNA全长为959 bp ，5 非编码区(UTR)长10 bp ，开放阅读框(ORF)长639 bp ，编码212个氨基酸，310 bp 的3UTR包含一个硒代半胱氨 209 211 67 酸插入序列(SECIS) ，ORF 中的密码子 TGA 编码硒代半胱氨酸(selenocysteine, U ) 。实 时定量PCR 实验结果表明，Pm Se-GPx 在斑节对虾的肝胰腺、卵巢、精巢、心脏等组织 中均有表达，其中肝胰腺中表达量显著高于其他组织，卵巢次之；卵巢发育阶段表达结 果则显示Pm Se-GPx 在卵巢发育各期均有表达，在卵巢Ⅲ期表达量最高，其次是V期；在 Cu2+ 胁迫下，其表达量总体呈现先下降后上升然后又下降的趋势；在环境pH 为9胁迫 下，表达趋势呈现先下降，后回升，然后又下降，再大幅上升的趋势。研究表明，Se- GPx在斑节对虾卵巢发育过程中具有重要作用，且Se-GPx参与斑节对虾对环境理化因子 应激的免疫调控。 关键词: 斑节对虾；含硒谷胱甘肽过氧化物酶；卵巢发育；Cu2+ 胁迫 中图分类号: Q 785 ；S 917.4 文献标志码: A 谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, 以谷胱甘肽(GSH)为底物，其反应中心通常由催 GPx)是在抗氧化防御系统中起到重要作用的一 化四联体(硒代半胱氨酸、色氨酸、天冬酰胺和