液相色谱!串联质谱分析组织中基因组脱氧核糖核酸羟甲基胞嘧啶水平.pdf

! #! 年$ 月 !#$ % %$ $ ’( ! #! !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+1 2 $%% $%’ 技术与应用 )*+ ：# $ %’!(, -. $ / $ ##!% $ ! ##$ #! #$ 液相色谱! 串联质谱分析组织中基因组 脱氧核糖核酸羟甲基胞嘧啶水平 陈丽宇，) 张立坚，) 张良滔，) 蔡) 春! （广东医学院，广东 湛江 $!(!% ） 摘要：$1 羟甲基胞嘧啶通过阻止脱氧核糖核酸（)%; ）甲基化转移酶 #（)% # ）甲基化胞嘧啶来影响 )%; 甲基化 的程度。本文建立了液相色谱1 串联质谱（=1 -, - ）测定组织中全基因组$1 羟甲基胞嘧啶水平的方法。采用苯 酚1 氯仿提取组织 )%; ，提取的)%; 用++? 甲酸在 #( @ 下裂解，)%; 裂解液加入同位素胞嘧啶作内标，经%! 吹 干后，加乙腈1 水（, - # ，A, A ）溶解，用 =1 -, - 检测$1 羟甲基胞嘧啶的含量，并计算全基因组中$1 羟甲基胞嘧啶 的水平。结果表明，$1 羟甲基胞嘧啶的线性范围为. # % 78, 2= ，相关系数为. ,,/ , ，检出限（信噪比为% 计）和 定量限（信噪比为 # 计）分别为 . $’ 78, 2= 和 . , 78, 2= ；日内相对标准偏差和日间相对标准偏差分别为 $. #%? 和/. !(? ；加标回收率为,. !(? ,’. $%? 。用该方法检测了大鼠大脑组织 )%; 羟甲基化水平，平均结果 为. //? 。该方法简便，重现性好，灵敏度较高，能满足全基因组$1 羟甲基胞嘧啶定量检测的要求。 关键词：液相色谱1 串联质谱；$1 羟甲基胞嘧啶；脱氧核糖核酸羟甲基化；组织 中图分类号： */$+) ) ) 文献标识码：;) ) ) 文章编号：#1+’ #% （! #! ）$1$%%1$ #$%’(’ )* +%),$% -.)/0(,)#12%.(2 $2(- ! !3-0)/4.53%25)’(#. (# 5(’’1. , %(61(- 230)4$5)+0$73 !5$#-.4 4$’’ ’7.250)4.50 B0% =3(6 ，CB;%D =3E 3’7 ，CB;%D =3’78F’ ，;+ 567 ! （!#$%’$% ( )*+#, -’,,)% ) ，./#$0 *#$% !#$% ，-/*$# ） ,’50$25 ：;G HI:A:7F378 9:J(I3K764#:34 ’439 （)%; ）2:F5(#’F37 FI’7GL:I’G: # （)% # ） 2:F5(#’F37 L F5: F’I8:F 4(FG37: ，$15(9IJ(2:F5(#4(FG37: 46#9 4’6G: ’#F:I’F37G 37 )%; 2:F5(#’F37 $ ; I’H39 ’7’#(F34’# 2:F59 LI F5: 9:F:I237’F37 L F5: 9:8I:: L 8#K’# )%;