非发酵菌的耐药性及产超广谱β—内酰胺酶.docVIP

PAGE PAGE 1 非发酵菌的耐药性及产超广谱β—内酰胺酶 　　[摘要]　目的　了解非发酵菌的耐药性及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和碳青霉烯酶的情况，以期为临床合理应用抗菌药物提供依据。　方法　应用VITEK-2全自动微生物分析系统对临床分离非发酵菌进行鉴定。按照美国临床实验室标准化委员会（CLSL/NCCLS　2010版）推荐的纸片扩散法检测156株非发酵菌对常见的15种抗生素耐药情况；按照NCCLS推荐的确认试验（双纸片增效试验）检测菌株产ESBLs情况；采用两种改良Hodge试验进行碳青霉烯酶表型确证。　结果　临床分离的156株非发酵菌前3位为鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌，均呈现高耐药率。鲍曼不动杆菌产ESBLs率为27.6%，铜绿假单胞菌产ESBLs率为37.5%。鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶率为50.0%，铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶率为13.3%。两种改良Hodge试验检测鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的一致性较好，检测铜绿假单胞菌碳青霉烯酶的一致性一般，但是无不确定结果。　结论　非发酵菌耐药率较高，产ESBLs和碳青霉烯酶情况已相当严重，检测碳青霉烯酶阳性的铜绿假单胞菌时，PAE-MHT（以肺炎克雷伯菌ATCC　700603作为指示菌的改良Hodge试验）优于MHT（以大肠埃希菌ATCC　25922作为指示菌的改良Hodge试验）。 　　[关键词]　非发酵菌；超广谱β内酰胺酶；碳青霉烯酶；改良Hodge试验 　　[中图分类号]　R378[文献标识码]　A[文章编号]　1673-7210（2012）12（c）-0109-04 　　非发酵菌是指一群不发酵糖类或仅以氧化形式利用葡萄糖、需氧或兼性厌氧的无芽胞革兰阴性杆菌，包括不动杆菌属、假单胞菌属、伯克霍尔德菌属等在内的9个属近百种细菌。近年来，由于各种广谱抗菌药物、化学治疗、放射治疗、侵袭性操作的开展及免疫抑制剂的应用，使非发酵菌已成为机会感染与医院感染的主要致病菌，尤其是铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌。并且这些菌株往往表现为多重耐药，给临床治疗造成了极大的困难。产β-内酰胺酶（ESBLs）是革兰阴性杆菌最重要的耐药机制，其中以产ESBLs和碳青霉烯酶最具有临床意义。本研究对2011年6月～2012年6月怀化市第三人民医院156株非发酵菌进行耐药性及产ESBLs和碳青霉烯酶分析，旨在为临床合理使用抗菌药物、降低医院感染发生率、预防和控制非发酵菌感染提供科学依据。 　　1　材料与方法 　　1.1　菌株来源 　　收集怀化市第三人民医院2011年6月～2012年6月各临床科室送检的微生物标本中分离的非发酵菌156株，同一患者无重复标本。 　　1.2　主要试剂与仪器 　　美罗培南（MEM）、亚胺培南（IPM）、哌拉西林/他唑巴坦（PIP/TZ）、头孢吡肟（FEP）、头孢他啶（CAZ）、头孢噻肟（CTX）、头孢哌酮/舒巴坦（CFP/SU）、阿米卡星（AK）、环丙沙星（CIP）、氨曲南（ATM）、庆大霉素（GM）、妥布霉素（TPM）、复方新诺明（SXT）、氨苄西林（AMP）、左旋氧氟沙星（LEV）、头孢噻肟/棒酸（CD03，30/10　μg）、头孢他啶/棒酸（CD02，30/10　μg），均为英国OXO　ID公司产品；M-H培养基干粉，由杭州天和微生物试剂有限公司提供；VITEK-2全自动微生物分析仪及与其配套的GN革兰阴性杆菌鉴定卡和YST　GN13药敏试验卡，由法国生物梅里埃公司提供。 　　1.3　质控菌株 　　大肠埃希菌ATCC　25922、铜绿假单胞菌ATCC　27853、肺炎克雷伯ATCC　700603、肺炎克雷伯菌ATCC　BAA-1705、肺炎克雷伯菌ATCC　BAA-1706，均购自卫生部临床检验中心。 　　1.4　细菌的分离培养、鉴定 　　按《全国临床检验操作规程》（第3版）进行细菌的分离培养和常规鉴定，采用Vitek-2微生物分析系统进行鉴定。 　　1.5　药物敏感性试验 　　根据美国临床实验室标准化委员会（CLSL/NCCLS　2010版）标准采用纸片扩散法（K-B法）检测常见非发酵菌对15种抗生素（IPM、MEM、PIP/TZ、FEP、CAZ）、CTX、CFP/SU、AK、CIP、ATM、GM、TPM、SXT、AMP、LEV）的耐药性。将大肠埃希菌　ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853作为药敏试验质控菌株。结果判断参照NCCLS　2010年判断标准。 　　1.6　β-内酰胺酶检测 　　初筛试验（CAZ≤22　mm，CTX　≤27　mm，ATM　≤27　mm，FEP　≤22　mm）为阳性的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌按NCCLS确认试验检测（纸片增效试验），即CTX（30　μg），CTX/CLV（CD03，30/10　μg）与CAZ