ELISA的概念、原理、操作步骤.pdfVIP

ELISA 的概念、原理、操作步骤 ELISA 是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射 免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自 70 年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛 用于生物学和医学科学的许多领域。 (一) 原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽 9 体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来 的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进 行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。 在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法( 图a)、用于检测抗 原的双抗体夹心法( 图b) 以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体 夹心法及ELISA 间接法。 (二) 操作步骤 方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 1. 包被：用 0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为 1～10 μg ／ml 。在每个聚苯 乙烯板的反应孔中加0.1ml，4 ℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗 3