血液学第四章--第二节--第三节.pptVIP

细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学。它以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。 细胞化学染色临床上用于： ①辅助判断急性白血病的细胞类型。因为不同细胞系列，其所含的化学物质成分、分布及含量各有不同，且随着细胞的逐渐成熟，化学物质的含量等发生相应的变化。因此根据细胞化学染色结果的不同，可推断所属的细胞系列，如过氧化物酶染色、非特异性酯酶染色、特异性酯酶染色等。故临床上急性白血病细胞类型的判断需要结合细胞化学染色。②辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断。因为血细胞在病理情况下，其化学物质成分及含量会发生改变，以辅助疾病的诊断，如中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。③观察疾病疗效和预后。④发病机制的探讨。所以，细胞化学染色是诊断血液系统等疾病不可缺少的手段。 不同细胞化学染色，染色步骤不同，但基本步骤为固定、显示及复染。 1、固定 为了保持细胞结构及化学成分的不变，需对细胞进行固定。根据染色的成分不同，选择合适的固定液，使细胞内的蛋白质、酶类、糖类等变成不溶性物质。固定的方法有物理法和化学法固定，临床上常用的是化学法固定。物理法包括干燥和火焰固定，化学法包括甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定，分为蒸气固定和液体固定。 （1）蒸气固定：甲醛是一种常用的固定剂，甲醛极易挥发、氧化，故常用40%甲醛进行蒸气固定。即在较封闭的玻璃器皿中加入40%甲醛，将涂片血膜朝下，固定5—10min。 （2）液体固定：将涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中，也可用两种或两种以上固定液混合面成，如10%甲醛甲醇液、甲醛丙酮液等。 2、显示 通过不同化学反应，最终形成稳定的有色沉淀，显示出被检测的化学物质。常用的化学反应种类有以下几种： （1）偶氮偶联法：含萘酚的底物，在相应酶的作用下释放出萘粉，萘粉与重氮盐结合，偶氮偶联形成有色沉演。重氮盐的种类有坚牢蓝紫酱GBC、坚牢蓝B、六偶氮付品红等。如中性粒细胞碱性磷酸酶染色、特异性酯酶染色、非特异性酯酶染色、酸性磷酸酶染色等。 （2）联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶，能分解过氧化氢释放出新生态氧，使无色的联苯胺氧化形成有色沉淀，如过氧化物酶染色。 （3）普鲁士蓝反应：细胞内、外的铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成如亚铁氰化钾蓝色沉淀，如铁染色。 （4）雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中的乙二醇基形成乙二醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀物，如过碘酸-雪夫反应。 （5）金属沉淀法：金属及其化合物一般都有颜色，故形成的沉淀物为有色物质，如钙钴法中性粒细胞碱性磷酸酶染色。 3、复染 复染的目的在于使各种细胞能显示出来以便于观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度，既能使细胞结构显示又能清楚地看出细胞化学染色结果。如铁染色复染常用中性红，过碘酸-雪夫反应常用甲基绿。对核着色效果较好的有中性红、甲基绿、苏木精、核固红、沙黄等，使浆着色较好的有伊红、刚果红、光绿等。 复染后，首先要通过显微镜观察染色是否成功（如过氧化物酶染色、碘酸、雪夫反应等可观察中性成熟粒细胞是否呈强阳性），然后观察相应细胞的染色结果并报告结果，结果的报告一般包括阳性率、积分或阳性分布情况。 细胞化学染色的种类有很多，下面介绍过氧化物酶染色、苏丹黑染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色、酸性磷酸酶染色、铁染色及酯酶染色。酯酶有多种，根据PH不同分为酸性、中性和碱性酯酶；根据酯酶特异性高低分为特异性酯酶和非特异性酯酶。非特异性酯酶包括酸性非特异性酯酶（即酸性a-醋酸蔡酚酯酶）、碱性非特异性酯酶（即a-丁酸蔡酚酯酶）和中性非特异性酯酶，后者包括a-醋酸萘酚酯酶、醋酸AS-D萘酚酯酶等。下面逐项介绍各种细胞化学染色。 一、过氧化物酶染色 [原理] 过氧化物酶(peroxidase,POX)染色方法有Washburn法、四甲基联苯胺法和改良的Pereira染色法等。前者曾是最为常用的方法，但由于其底物联苯胺具有致癌性，故现常用后两者，下面分别介绍这两种方法的原理。 四甲基联苯胺法 粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶，POX能分解H2O2而释放出新生氧，使四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色物质，沉淀于酶活性的细胞质内。 改良的Pereira染色法 粒细胞和部分单核细胞中POX能分解H2O2而释放出新生氧，使碘化钾氧化生成碘，碘再与煌焦油蓝作用形成蓝绿色沉淀，定位于酶活性的细胞质内。 [正常血细胞的染色反应] 1、粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性，分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞均呈阳性；且随着细胞的成熟，阳性反应的程度逐渐增强。中性分叶核粒细胞