第十八章重组人红细胞生成素生产工艺.pptVIP

红细胞生成素 纯度，蛋白质含量，分子量等 体外活性：ELISA测定（原理免疫沉淀），单 位unit（IU） 体内活性：网织红细胞计数法，注射BALB/c小 鼠，眼眶取血，染色，涂片计数网织红细胞数。 比活性(U/mg)：单位重量蛋白质(mg) 中所含的活性 培养过程与工艺控制 18.4. 3 产品质量控制 抗体药物制备 鼠源单克隆抗体 19.2.1 杂交瘤细胞系的建立 1、 杂交瘤制备原理 B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这 种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限 的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也 是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形 成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是 既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴 细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠 体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即 称为单克隆抗体技术。 * * 第一节 概述 第二节 工程CHO细胞系的构建 第三节 CHO细胞系培养过程与工艺控制 第四节 分离纯化工艺 第十八章 重组人红细胞生成素生产工艺 概 述 18.1.1 红细胞生成素的种类 18.1. 2 红细胞生成素的临床应用 18.1. 3 红细胞生成素的理化性质 18.1. 4 红细胞生成素的表达研究 红细胞生成素 第一节 概 述 概 述 18.1.1 红细胞生成素的种类 红细胞生成素 1、天然红细胞生成素的生成和作用原理 1890：现象，低氧压下红细胞增多 1948：Bonsdorff和Jalavisto，提出红细胞生成素 （erythropoietin，EPO） 动脉氧分压是EPO生成调节因素 概 述 红细胞生成素 2、天然红细胞种类 1971年：从贫血羊血桨中分离出羊EPO 1977年：从再障碍贫血患者的尿液中分离纯化出人EPO hEPO形式：hEPO-α及hEPO-β，二者氨基酸组成及顺 序相同，165aa，活性类似 糖基化及其含量不同：EPO-α含有较多的N-乙酰 葡萄糖，总含糖量比EPO-β高。 概 述 红细胞生成素 3、红细胞生成素的生理作用 红细胞生成素，又称促红细胞生成素，或红细胞生成 刺激因子：调节红系祖细胞，对红细胞生成有特异性 刺激作用的细胞因子。 EPO与靶细胞结合：骨髓、脾、肝细胞等，促进前体细胞增殖和分化，生成RBC 概 述 红细胞生成素 4、重组人红细胞生成素 第一代：两种，天然基因表达，rhEPO-α和rhEPO-β 1989：Amgen, Epogen；1990，Biotech，Procrit rhEPO-α，CHO细胞生产 Roche，NeoRecormon(rhEPO-β)，BHK细胞系 概 述 红细胞生成素 4、重组人红细胞生成素 用基因工程技术生产的人红细胞生成素 第二代：EPO突变体 2001，Amgen，Arasnep长效 rhEPO-α突变体，170aa，有5个N糖基化位点 唾液酸残基高2倍，半衰期36h（EPO为4-8h） CHO细胞系生产 概 述 红细胞生成素 适应症：各类贫血 起因：慢性肾衰竭、AIDS、肿瘤、化疗等引起的贫血 开发新的临床适应症：肾病和糖尿病 在生物制品中排位NO.1，2004年全球销售额11.9BUSD， 重磅 炸弹药物 各类体育竞技中，禁止使用的药物？ 18.1. 2 红细胞生成素的临床应用 概 述 红细胞生成素 大小：166aa 糖链占分子量的39% 糖基化程度与准确性对活性影响很大 pI4.2～4.6，对热和pH变化相对稳定。 18.1. 3 红细胞生成素的理化性质 概 述 红细胞生成素 天然提取制药工艺： 由再生障碍性贫血患者的尿液中纯化而得，人源的红 细胞生成素。产量极其有限。 （未用生产） 基因工程制药工艺： 重组人红细胞生成素（应用生产中） 化学制药工艺： 基于红细胞生成素的受体，研究与红细胞生成素功能 相当的化学药物（开发中） 18.1. 4 红细胞生成素的表达研究 概 述 红细胞生成素 重组人红细胞生成素工艺路线的研究 SV40病毒启动子驱动表达载体，在COS-1中瞬时表达 红细胞生成素 昆虫SF9细胞中杆状病毒系统表达rhEPO。产率有所改 善，但糖基化程度较小 干扰素-α基因启动子的rhEPO表达载体，BALL-1细胞， 产生较高量的rhEPO 概 述 红细胞生成素 重组人红细胞生成素工艺路线