EB病毒相关胃癌组织中NF―κB和bcl―2蛋白表达探究.docxVIP

EB病毒相关胃癌组织中NF- kB和bcl—2 蛋白表达探究 【摘要】目的探讨NF-kB及bcl-2蛋白在EB病 毒相关性胃癌(EBVaGC)与非EB病毒相关性胃癌(EBVnGC) 中的表达及意义。方法应用原位杂交技术(ISH)检测84 例胃癌组织中EB病毒小RNA (EBER)表达情况；应用免疫组 织化学方法(S-P法)检测84例胃癌组织中NF-kB及bcl-2 蛋白表达情况。结果(1)9例(10. 7%)胃癌组织EBER原位杂 交阳性，属于EBVaGC； 75例(89. 3%)胃癌组织EBER原位 杂交阴性，属于 EBVnGC o(2)9 例 EBVaGC 中 7 例(77. 8%)NF— k B 表达阳性,75例EBVnGC中28例(37. 3%) NF- k B表达阳性, NF-kB的表达在EBVaGC及EBVnG间存在差异(P0.05)。结 论EBVaGC中NF-kB蛋白的高表达，提示EB病毒可能通过 影响细胞转录调控而参与了 EBVaGC发生、发展的过程。 【关键词】EB病毒相关性胃癌；非EB病毒相关性胃癌; NF-kB； bcl-2 【中图分类号】R735.2【文献标识码】B【文章编号】 1005-0019 (2013) 12-0015-01 基金项目：广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题 (合同号：Z2011113) EB病毒(EBV)属于DNA疱疹病毒，该病毒编码大于85 个基因组，大部分人群都感染过EB病毒，而且EB病毒与很 多淋巴源性及上皮源性肿瘤密切相关。有研究表明，约有10% 的胃癌与EB病毒感染有关[1],故这类胃癌又被称为EB病 毒相关性胃癌（EBVaGC）。NF-kB作为重要的转录调控因子, 起着核心枢纽作用，它可以调控很多基因表达，而这些基因 又与细胞增殖、分化、凋亡、免疫反应、转化有着密切的联 系；bcl-2能抑制细胞凋亡，延长细胞生存期，进而引发肿 瘤。胃癌的发生、发展是一个多步骤、多因素影响的过程， 涉及的机制非常复杂，本文通过原位杂交方法检测胃癌中 EBER表达情况及免疫组化方法检测NF- k B和bcl-2的表达 情况，探讨它们与胃癌临床病理特征的关系及意义。 1材料与方法 1.1 一般资料 选择广西中医药大学第一附属医院2008 年1月?2013年6月手术切除并经病理检测证实为胃癌的蜡 块标本84例，所有病例术前均未进行放疗、化疗，病理类 型均为腺癌。其中男性48例，女性36例；年龄32?87岁, 平均年龄56岁。 1. 2 EBER原位杂交EBER原位杂交试剂购于PanPath公 司。组织蜡块切成4uni粘附于防脱片上，常规脱蜡及水化， 蛋白酶K消化。滴加适量杂交液，551下孵育1. 5小时，转 移至37*下孵育12小时，PBS浸泡洗涤，滴加适量一抗， 于379下孵育30分钟，拭去组织周围的液体，滴加适量二 抗，于室温下孵育20分钟。拭去组织周围的液体，滴加适 量HRP聚合物，室温下孵育30分钟，PBS浸泡洗涤后滴加适 量DAB显色液，在室温下孵育约3-10分钟，同时在镜下观 察显色程度。 1. 3免疫组织化学法NF-kB及bcl-2单克隆抗体均购 自北京中杉金桥生物技术有限公司。5um厚切片。常规脱蜡 水化后，柠檬酸高压修复，3%H202阻断内源性过氧化物酶， 其余步骤按试剂盒说明进行操作。用PBS替代一抗作为阴性 对照，用已知阳性片作为阳性对照。 1.4结果判读EBER原位杂交结果判定：EBER阳性表达 于细胞核，呈棕黄色。免疫组化采用Volm使用的半定量法 ： NF-kB阳性表达部位为胞质和（或）胞核，bcl-2阳 性表达部位为胞质和（或）胞膜。1.5统计学分析应用 SPSS15. 0软件进行统计学分析，P0. 05）（详见表1）。 图1胃癌中EBER的表达X200 图2胃癌中NF-kB的表达X200 图3胃癌中bcl-2的表达X200 表1胃癌组织中NF-kB及bcl-2蛋白表达情况 3讨论 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在消化道的恶性肿瘤中 居首位。主要分布在亚洲、拉丁美洲和中欧地区，我国胃癌 发病率很高。胃癌的发生与发展是一个复杂的过程，涉及基 因异常表达、细胞传导异常及细胞凋亡抑制等机制。EB病毒 是与人类关系最密切的病毒之一，而且它与很多恶性肿瘤关 系密切，例如鼻咽癌、伯基特淋巴瘤等等。自1991年Shibata 等[3]首次在胃癌细胞中发现EB病毒以来，EB病毒相关性 胃癌逐渐成为研究热点，国外研究报道胃癌EBV感染检出 率7. 3%?16. 9%[4],而且不同地区胃癌中EB病毒感染率 存在明显差异。本研究中84例胃癌标本，有9例胃癌EBER 阳性，阳性率为10. 7%,与文献报道相符。在实验中发现, 胃癌里大部分癌细胞都有EBER表达，由此推测EB病毒感染